高海娜，蔡周权，林莺，文霞，孙慧峰

    松脂醇二葡萄糖苷对光老化HDF细胞ER/TGF-β1/Smads信号通路的调控机制

    高海娜，蔡周权，林莺，文霞，孙慧峰

    621000 绵阳，四川省科学城医院药剂科(高海娜、蔡周权、林莺、文霞)；150040 哈尔滨，黑龙江中医药大学药学院(孙慧峰)

    从分子生物学水平探讨杜仲中松脂醇二葡萄糖苷(PDG)对光老化人真皮成纤维细胞(HDF)ER/TGF-β1/Smads 信号通路的调控机制。

    建立以长波紫外线模型损伤 HDF 细胞。给予不同浓度 PDG 和通路阻断剂进行干预，用MTT 检测细胞增殖率，Real time-PCR 和 Western blot 法检测各组细胞内含有的信号转化生长因子(TGF-β1)、转导分子(Smad3)、I 型胶原(COL1A1)对应 mRNA 和蛋白的表达。

    与空白组比较，模型组增殖率及 TGF-β1、Smad3、COL1A1 mRNA 和蛋白表达均显著降低(1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株 人真皮成纤维细胞(HDF)购自美国 Sciencell 公司。

    1.1.2 试剂 17β 雌二醇纯度为 98%，购买于北京百灵威科技有限公司，生产批号为 L750N46；PDG 纯度为 98%，购买于宝鸡市辰光生物科技有限公司，生产批号为 MUST-13021001；COL1A1 阻断剂 SB431542(生产批号301836-41-9)和Smad3 阻断剂 SIS3(生产批号 1009104-85-1)以及TGF-β1、COL1A1、Smad3、HRP 标记羊抗兔 IgG 均购自Santa Cruz Biotechnogy；TGF-β1 阻断剂 ICI182780(生产批号 20A/129473)购自 Tocris 公司；HRP 标记羊抗小鼠 IgG 购自武汉博士德生物工程有限公司。

    1.1.3 主要仪器 UVA 紫外照射仪购自北京师范光电仪器厂；MK3 型酶标仪购自上海热电仪器有限公司；WD9405B 型水平摇床购自北京市六一仪器厂；TCL6G-C 型高速台式冷冻离心机购自上海安亭科学仪器厂；Mini-Protean Tetra Cell 型电泳仪购自Bio-Rad 公司；PCR 自动扩增仪购自德国Biometra 公司；Smart ChemiTM500 型一体式微型化学发光成像仪和ChamlGelTM5000 透射紫外观察仪及凝胶成像系统购自北京赛智创业科技有限公司 ......