王彬，彭昊，陈云昭

    哈族食管鳞癌中PLCE1基因启动子甲基化水平的实验研究

    王彬，彭昊，陈云昭

    832000 新疆，石河子大学医学院病理科新疆地方与民族高发病重点实验室

    探讨 PLCE1基因启动子甲基化与食管鳞癌发生发展的关系。

    分别用免疫组化(IHC)和甲基化特异 PCR(MSP)方法检测 51 例新疆哈萨克族食管鳞癌及相应癌旁正常组织中 PLCE1 蛋白表达水平及其启动子甲基化水平，分析其与病理资料相关性；分别用 Western blot 及 MSP 检测食管鳞癌细胞在 5-aza-dC 作用前后 PLCE1 蛋白表达及启动子甲基化变化情况。

    新疆哈萨克族食管鳞癌组织中 PLCE1 蛋白表达高于癌旁正常组织，而其基因甲基化水平则较低(1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 病历资料 本实验收集伊犁哈萨克自治州友谊医院等医院病理科 2000 – 2013 年间石蜡包埋的术前未经任何治疗的新疆哈萨克族食管鳞癌患者癌组织及相应癌旁正常组织各 51 例，同时收集患者临床病理资料。

    1.1.2 材料与试剂 人食管鳞癌细胞株 Eca109、EC9706、TE-1、Kyse150 均购自上海复祥生物科技有限公司；山羊抗人 PLCE1(sc-28404)抗体购自 Santa Cruz 公司；小鼠抗人 β-actin(TA-09)抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司；QIAamp DNA FFPE Tissue Kit、EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit 购自德国 Qiagen 公司；甲基转移酶抑制剂 5-aza-dC 购自美国 Sigma 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及实验分组 食管癌细胞 Eca109、EC9706、TE-1、Kyse150 用含 10% 胎牛血清及青、链霉素(均为 100 U/ml)的 DMEM 培养基重悬，以 1 × 104个/ml 的浓度接种 24 孔板，置于 37 ℃、5% CO2细胞培养箱中孵育。5-aza-dC 处理组：细胞培养 24 h 后用含 5-aza-dC(1.0 × 10-3mol/L)的培养基换液；对照组：细胞同期培养，只换液，不加入 5-aza-dC。

    1.2.2 免疫组织化学观察 选择患者病理组织蜡块，制作切片，按梯度浓度用二甲苯对切片脱蜡，用乙醇进行水化，用 EDTA 进行抗原修复，用 H2O2孵育，切片用牛血清封闭后添加一抗在 4 ℃冰箱孵育过夜 ......