谭亚军，夏德菊，李喆，晁哲，田霖，董国霞，侯启明，马霄

    白喉和破伤风类毒素抗原ELISA检测方法的建立

    谭亚军，夏德菊，李喆，晁哲，田霖，董国霞，侯启明，马霄

    100050 北京，中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室/卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

    建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。

    分别采用白喉、破伤风单抗包被酶标板，兔抗白喉、破伤风多抗作为二抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 IgG 抗体作为酶标抗体，以平行线法建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原含量的夹心 ELISA 法，并进行方法学验证。

    两种定量检测 ELISA 方法的验证结果均符合规定。检测白喉类毒素抗原 ELISA 方法的定量限为 8.90 ×10-4Lf/ml，回收率为 98.35%，批内变异系数(CV)≤ 10.59%，批间 CV ≤ 13.51%；检测破伤风类毒素抗原 ELISA 方法的定量限为 2.13 × 10-3Lf/ml，回收率为 107.28%，批内 CV ≤ 13.96%，批间 CV ≤ 10.06%。

    建立了白喉、破伤风类毒素抗原 ELISA 检测方法，该法特异性强、准确度高、重复性好，可用于白喉破伤风疫苗产品的质量控制和生产过程控制。

    白喉； 破伤风； 抗原； 白喉-破伤风菌苗； 酶联免疫吸附测定

    白喉和破伤风疫苗作为计划免疫品种，在我国得到了广泛应用，可以有效预防白喉、破伤风疾病，疫苗的基础组成分别是白喉类毒素(diphtheria toxoid，DT)和破伤风类毒素(tetanus toxoid，TT)。两种疫苗的生产工艺基本相同，方法较为传统，均为细菌在适宜的培养基中培养，产生的毒素经精制、甲醛脱毒成类毒素，再加入铝佐剂吸附制成。除作为疫苗使用外，近年随着国内外细菌多糖蛋白结合疫苗的发展，类毒素因其良好的免疫原性已成为应用最多的蛋白载体[1-2]。

    目前的 2015 年版《中国药典》三部规定白喉和破伤风类毒素抗原含量的检测方法是采用絮状沉淀法[3]，以絮状单位(flocculation units，Lf)表示，该方法操作较为复杂，人工终点判断较难掌握。我们利用类毒素免疫新西兰大白兔制备多抗，半固体培养基法制备单克隆抗体，以平行线法建立了白喉和破伤风类毒素的夹心酶联免疫测定法。该方法可用于白喉破伤风疫苗的鉴别试验、组分含量测定、吸附度测定等质量控制项目以及疫苗生产过程监测。

    1 材料与方法 ......