张凯红，刘雪剑，孙百川，黄绍代，鲁长风，曲鹏玮，韩运宁，余文，孙逊，许文静，汪爱媛，王玉，卢世璧，彭江，亓建洪

    大鼠尾腱细胞外基质制备方法及其用于肌腱损伤修复的前期研究

    张凯红，刘雪剑，孙百川，黄绍代，鲁长风，曲鹏玮，韩运宁，余文，孙逊，许文静，汪爱媛，王玉，卢世璧，彭江，亓建洪

    271016 泰安，泰山医学院运动医学研究所(张凯红、曲鹏玮、韩运宁、亓建洪)；100853 北京，中国人民解放军总医院骨科研究所(张凯红、刘雪剑、孙百川、黄绍代、鲁长风、余文、孙逊、许文静、汪爱媛、王玉、卢世璧、彭江)

    探究大鼠尾腱细胞外基质制备方法及其复合脂肪间充质干细胞构建微组织，为组织工程法修复肌腱损伤所需生物材料提供实验基础。

    取 20 只 150 ~ 200 g SD 大鼠鼠尾作为实验材料，分别抽取出大鼠尾腱，经 PBS 彻底清洗后反复冻融 3 次，然后经过 1% SDS 于室温下处理 24 h，并用大量 PBS 清洗 1 周除去细胞残渣，最后60Co 消毒备用。对制备的大鼠尾腱细胞外基质进行病理学染色，观察细胞残留情况。同时，检测该来源的生物源性材料残留 α-Gal 含量。此外，观察制备的大鼠尾腱细胞外基质复合脂肪间充质干细胞对细胞增殖的影响。同时，用 CCK-8 试剂盒检测该生物材料的细胞毒性。

    大体观察可见，经脱细胞处理过的尾腱体积增大，呈乳白色匀浆状。HE 以及 DAPI 染色结果显示，经脱细胞处理后的尾腱细胞核大量减少，细胞数量显著降低，每个高倍镜视野内细胞残余量不大于 5 个。脱细胞尾腱残留 α-Gal 含量与正常尾腱相比有统计学差异，脱细胞尾腱残留 DNA 极少。复合脂肪间充质干细胞培养 7 d 相比培养1 d 活细胞数量明显增多。CCK-8 毒性测试结果显示这种脱细胞大鼠尾腱的生物相容性较好，没有细胞毒性。

    经过脱细胞方法制备的大鼠尾腱细胞外基质可有效除去细胞成分，并且与脂肪间充质干细胞有较好的生物相容性，可作为一种生物材料用于肌腱损伤修复。

    细胞外基质； 肌腱修复； 大鼠尾腱

    肌腱是维持关节稳定以及正常运动的重要结缔组织，由于肌腱组织细胞分布和营养血供较少，一旦损伤，其自我修复能力较差[1]。此外，肌腱的损伤还会导致一系列的并发症，诸如关节不稳、软骨损伤、骨性关节炎等，严重时甚至影响关节的正常功能。每年在全球范围内有超过 3000 万肌腱和韧带损伤病例发生[2]，其中大多数与体育相关。然而，用目前的治疗手段很难使损伤的肌腱完全恢复到伤前的状态。因此，如何提高损伤肌腱的愈合效果以及最大限度恢复其正常功能是目前医学面临的一项重大难题 ......