梅承翰，庄慧敏，刘师卜，牛厚菊，刘婷

    直接肽反应试验及其研究进展

    梅承翰，庄慧敏，刘师卜，牛厚菊，刘婷

    550016 贵阳，贵州省分析测试研究院应用基础研究室(梅承翰、牛厚菊)；550004 贵阳，贵州医科大学附属医院医务处统计室(庄慧敏)；100050 北京，中国食品药品检定研究院食品检定所毒理功效实验室(梅承翰、刘师卜、牛厚菊、刘婷)

    变应性接触性皮炎(allergic contact dermatitis，ACD)是人类最常见的免疫毒性疾病之一。据估计 15% ~ 20% 的人会对一到多个市场中的化学品皮肤过敏[1]。支持皮肤致敏过程并最终导致 ACD 的关键机理事件已被阐释清楚。经济与合作发展组织(Organization for Economic Cooperation and Development，OECD)报告中将其定义为有害结局通路(adverse outcome pathway，AOP)[2]。皮肤致敏性评价作为物质安全性评价的重要组成部分并代表了化学品的技术标准。近年来，特别是欧洲国家，发展替代方法用以取代动物试验的社会、科学和经济的压力显著增加。为此，众多研究者开发基于肽或蛋白反应活性的方法用以筛选并鉴定潜在皮肤致敏物质，其中包括直接多肽反应试验(direct peptide reactivity assay，DPRA)。DPRA 立足于 AOP 中的分子起始事件，通过监测待测物对半胱氨酸和赖氨酸多肽的消除从而评估待测物的致敏性，其准确度和灵敏度较高，并易于操作。2013 年欧洲替代方法研究中心将 DPRA 推荐为皮肤致敏试验的方法，今已被 OECD 接受并公布[3]。该文将从 DPRA 的原理、局限性、优化发展和与其他替代方法的整合等方面作详细介绍。

    1 基本原理

    化学品与皮肤中蛋白的亲核中心共价结合，此即为皮肤致敏有害结局通路中的分子起始事件，若无该事件，则皮肤致敏一般不会发生[4]。因此如化学品可直接或经适当生物转化后与蛋白反应，便具有潜在皮肤致敏性。上述反应产物刺激朗格罕细胞从表皮向局部皮肤引流淋巴结转移，并将抗原呈递至初始型 T 细胞，导致抗原特异性记忆 T 细胞克隆增殖，最终导致 ACD 临床表征[5]。皮肤致敏物或其代谢产物的亲电子性，使其可与含亲核位点的蛋白反应。DPRA 利用含半胱氨酸和赖氨酸的多肽作为亲核试剂。待测物与上述多肽共孵育后，以高效液相色谱法检测多肽的消除程度并以此来评估待测物的反应能力。将多肽反应数据与已有的局部淋巴结分析(local lymaph node assay ......