花光斌，朱国玺，苏煜强

    miR-429在食管鳞癌中的表达及对细胞增殖迁移的影响

    花光斌，朱国玺，苏煜强

    454000 焦作，河南省焦作市焦煤集团中央医院心胸外科

    探讨微小 RNA-429(miR-429)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对细胞增殖及迁移的影响。

    选取本院 45 例 ESCC 患者手术切除的癌组织(ESCC组)及癌旁组织(正常组)标本为研究对象，并采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测两组 miR-429 表达水平。体外培养 ESCC 癌细胞株系 ECa109 及人正常食管上皮细胞株 Het-1A，将转染试剂、miR-429 阴性对照质粒、miR-429 mimic 质粒分别转染 ECa109 细胞，命名为空白组、阴性转染组、miR-429 过表达组，同时应用生物信息学工具预测 miR-429 的靶基因为 CTl0 激酶调节子样蛋白(CRKL)，荧光素酶活性检测 miR-429 与 CRKL 的靶向调控关系。采用 qRT-PCR 法检测细胞中 miR-429 与 CRKL mRNA 表达水平，蛋白免疫印迹法检测细胞中CRKL 蛋白表达。MTT 法检测细胞增殖情况，Transwell 检测细胞迁移能力。

    与正常组相比，ESCC 组 miR-429 表达水平显著降低(0.05)；与 Het-1A 细胞相比，ECa109 细胞中miR-429 表达水平显著降低(1 资料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 一般资料 选取 2017 年 2 月– 2018 年 3 月本院收治的 45 例 ESCC 患者为研究对象，所有患者均经手术病理证实，其中男 23 例，女22 例，年龄为 57 ~ 72 岁，平均年龄 65.24 ± 8.87 岁。将手术切除 ESCC 癌组织标本 45 例作为 ESCC 组，另选取相应癌旁组织标本45 例为正常组，并将切除的组织标本分别放置–80 ℃冰箱保存待测。纳入标准：①未患有其他食管病变者；②所有患者术前均未接受化疗或放疗；③所有患者知情且签署同意书。排除标准：①合并其他恶性肿瘤者；②自身免疫性疾病者；③精神疾病患者；④心、肝、肾等严重损伤者；⑤临床资料不完整者。

    1.1.2 主要试剂与仪器 Lipofectamine 2000 转染试剂购于美国 Invitrogen 公司；MTT 购于北京索莱宝科技限公司；CRKL 抗体购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司；RNA 与 qRT-PCR 检测试剂盒选购于天根生化科技有限公司；蛋白提取试剂盒购于美国 Thermo Fisher Scientific 公司；双荧光素酶报告基因鉴定试剂盒购自于美国 Omega 公司；ABI PCR 仪与蛋白凝胶成像仪均购自美国 Bio-Red 公司 ......