文海若，任璐，王瑜，姜华，李艳秋，耿兴超，李波，黄芝瑛，王雪

    比较碱性彗星试验与γ-H2AX法评价甲醛诱导的DNA交联

    文海若*，任璐*，王瑜，姜华，李艳秋，耿兴超，李波，黄芝瑛，王雪

    100176 北京，中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心/药物非临床安全评价研究北京市重点实验室(文海若、任璐、姜华、耿兴超、李波、王雪)；510006 广州，中山大学药学院(任璐、黄芝瑛)；100015 北京，珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司(王瑜、李艳秋)

    DNA 交联是环境诱变剂和化学致癌物诱发的遗传物质损伤之一，主要包括 DNA-蛋白质交联(DNA-protein crosslink，DPC)和 DNA-DNA 交联(DNA-DNA crosslink，DDC)两类[1]。DNA 交联的形成可导致 DNA 复制过程中重要基因的丢失，从而造成染色体缺失、重排、转位、倒置等染色体结构和数目的畸变，对子代细胞的遗传物质产生影响，严重时可导致肿瘤或子代畸形[2]。DNA 交联与断裂相比难于修复或易于形成错误修复，且在细胞周期中可维持较长一段时间。故世界卫生组织(WHO)提出 DNA 交联可作为 DNA 损伤的生物标志物，用于对化合物或环境因素的潜在遗传毒性进行筛查[3]。常见的可导致 DNA 交联的药物或因素包括甲醛、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、油烟、氧化型染发剂、电离辐射等。

    使用小牛胸腺 DNA 开展的溴化乙锭荧光分析法(ethidium bromide fluorescence assay，EFA)是经典的检测 DNA 交联的方法之一，该方法利用溴化乙锭嵌入双链 DNA(而非单链 DNA)后荧光强度可明显升高，以及热变性后交联的 DNA 无法解链从而维持高荧光强度的原理，对化合物的潜在 DNA 交联作用进行检测[4]。因溴化乙锭荧光分析法应用 96 孔细胞培养板和荧光酶标仪进行检测，快速而简便，是常用的 DNA 交联水平检测方法。近年来，随着同时检测 DNA 单链和双链断裂的碱性彗星电泳试验(又称碱性单细胞凝胶细胞电泳，电泳条件 pH > 13)技术在遗传毒性评价领域的普及，也逐渐兴起通过在彗星电泳中额外添加断裂剂[5-7]，如过氧化氢(H2O2)或蛋白酶 K，来检测受试物的 DNA 交联效应。此外，以聚集于 DNA 双链断裂位点的磷酸化的 H2AX 组蛋白(γ-H2AX)作为生物标志物的 γ-H2AX 试验也是一种新兴的用来评价 DNA 双链断裂水平的试验方法[8]。与传统的溴化乙锭荧光法相比，彗星电泳和 γ-H2AX 试验均在细胞培养条件下加样处理 ......