王楠，姜允嘉，王洋，赵晓宏，郭鹏，蔡大勇，谢勇

    以高热稳定性的腺苷酸基琥珀酸合成酶为催化剂大量合成腺苷酸基琥珀酸(盐)

    王楠，姜允嘉，王洋，赵晓宏，郭鹏，蔡大勇，谢勇

    100193 北京，中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室

    实现腺苷酸基琥珀酸(盐)(S-AMP)的大规模合成，为开展药物学等研究提供原料。

    以 pET-28-a 为表达载体，利用大肠杆菌表达古细菌OT3 来源的腺苷酸基琥珀酸合成酶(PhAdSS)，利用 Ni-NTA 层析柱纯化后作为催化剂在实验室内开展这种微生物体内合成 S-AMP 的反应。用 Bradford 法测定纯化后 PhAdSS 的浓度。利用硅胶薄层层析检测反应进度。用硅胶柱层析法和重结晶法纯化S-AMP，利用质谱法测定合成品中 S-AMP 的分子量，利用紫外分光光度法测定合成品内 S-AMP 的含量及回收率。

    经纯化后从 1 L 的自动诱导培养基中至少获得 20 mg的His-tagged-PhAdSS。将含有 10 mmol/L 肌苷酸、11 mmol/L L-天冬氨酸、20 mmol/L 鸟苷三磷酸、4 mmol/L MgCl2、2.9 μmol/L 的 His-tagged-PhAdSS 溶液于常压环境中，70 ℃恒温6 h 以上可以实现 IMP 完全转化为 S-AMP。纯化后可得到 S-AMP 的单晶体，利用紫外分光光度法测定的纯度为 94%，收率为 17%。

    实现了 PhAdSS 为催化剂的 S-AMP 的大量合成。

    腺苷酸基琥珀酸(盐)； 腺苷酸基琥珀酸合酶； 古细菌OT3

    腺苷酸基琥珀酸(盐)[adenylosuccinic acid(adenylosuccinate)，S-AMP]存在于所有生物体内，由腺苷酸基琥珀酸合成酶(adenylosuccinate synthetase，AdSS)利用肌苷酸(IMP)、L-天冬氨酸和鸟苷三磷酸(GTP)为原料合成[1]。S-AMP 是合成 AMP 的前体化合物，具有刺激胰岛素分泌，促进II型糖尿病患者胰岛 β 细胞恢复正常的功能[2]。我们发现在 HepG2 细胞内 S-AMP 能激活腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)，提升细胞的糖脂质代谢效率[3-4]。因此，S-AMP 可作为改善糖脂代谢紊乱疾病新药的先导化合物开展成药性研究。仅有 Sigma公司曾经销售过纯度 96% 的 S-AMP，现已停产。为了保障 S-AMP 成药性研究的原料所需 ......