文海若，任璐，罗飞亚，汪祺

    比较细胞松弛素A与B在胞质分裂阻断法微核试验中的应用

    文海若，任璐，罗飞亚，汪祺

    100176 北京，中国食品药品检定研究院安全评价研究所(文海若、任璐)，化妆品检定所(罗飞亚)，中药民族药检定所(汪祺)；510006 广州，中山大学药学院(任璐)

    比较细胞松弛素 A(Cyto A)及细胞松弛素 B (Cyto B)对微核试验常用细胞系——中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)毒性及对体外微核试验结果的影响。

    在荧光显微镜下观察由微丝组成的应力纤维结构，并使用 CHL 开展胞质分裂阻断法微核试验，比较两者对多核细胞率及含微核双核细胞率的影响。

    不同浓度的 Cyto A 和 Cyto B 与细胞作用 24 h 后，与对照组(26% ± 7%)比较均可诱导多核细胞形成率的显著升高(Cyto A 及 Cyto B 3.0 μg/ml 浓度组分别为58% ± 12% 和 72% ± 9%，

    图 1 细胞松弛素 A 与细胞松弛素 B 的化学结构

    Figure 1 Chemical structures of cytochalasin A and cytochalasin B

    1 仪器与材料

    1.1 材料

    1.1.1 实验仪器 BX40 型正置光学显微镜购自日本 Olympus 公司；5810R 型离心机购自美国Eppendorf 公司；NTS-1300 恒温振荡水槽购自东京理化器械株式会社；荧光酶标仪购自美国伯腾公司；Operetta 高内涵成像系统购自英国珀金埃尔默公司。

    1.1.2 材料与试剂 ddH2O 使用本中心 MilliQ-A10 超纯水机生产的超纯水，121 ℃、15 min 高压灭菌，4 ℃冰箱保存；RPMI 1640 培养基、1% 青链霉素混合液、0.25% 胰蛋白酶-EDTA、胎牛血清均购自美国 Gibco 公司；DMSO 购自美国 Sigma 公司；PBS 购自美国 Hyclone 公司；Cyto A 与 Cyto B购自北京索莱宝科技有限公司，用 DMSO 配成 5 mg/ml 溶液，–20 ℃保存；Perm/Wash buffer(554723)购自美国BD 公司；Alexa FluorTM488 鬼笔环肽(A12379)购自美国ThermoFisher 公司；Hoechst 33342 购自美国Invitrogen 公司。细胞为中国仓鼠肺细胞(Chinese hamster lung cell ......