李凌，来芳芳，杜婷婷，张森，刘盈，陈晓光

    不同刺激剂对淋巴细胞中PD-1与TIM3蛋白表达的影响

    李凌，来芳芳，杜婷婷，张森，刘盈，陈晓光

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/创新药物非临床药物代谢及PK/PD研究北京市重点实验室

    研究不同刺激剂对人外周血淋巴细胞中 PD-1 与 TIM3 蛋白表达的影响。

    采用密度离心法分离人外周血淋巴细胞，并通过 Western blot 检测在抗CD3/CD28 抗体、PHA、SEB、ConA 4 种不同刺激剂下人外周血淋巴细胞 PD-1 与 TIM3 总蛋白的变化情况，并通过流式细胞技术检测 4 种刺激条件下 T 淋巴细胞及其 CD3+CD4+、CD3+CD8+亚群膜表面的 PD-1 与 TIM3 的改变。

    Western blot 结果显示，4 种刺激剂均能刺激总的 PD-1 蛋白的表达，减少总 TIM3 蛋白的表达。流式细胞分析仪结果显示，在 4 种刺激剂作用下，人外周血 T 淋巴细胞表面及其 CD3+CD4+、CD3+CD8+T 细胞亚群膜表面的 PD-1 与 TIM3 蛋白表达均呈现升高趋势。

    4 种常见刺激剂均可诱导总 PD-1 蛋白和细胞膜上 PD-1 蛋白的表达，降低 TIM3 总蛋白的表达以及诱导淋巴细胞表面 TIM3 蛋白的表达。其中 PHA 较其他 3 种刺激剂展现出较好的剂量关系。

    程序性细胞死亡受体 1； T 细胞免疫球蛋白黏液素 3； 淋巴细胞增殖； 流式细胞术

    肿瘤免疫疗法是继传统的肿瘤治疗，即化疗、放疗和手术切除之后的第四种肿瘤治疗方法[1]，其通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应。近年来，针对以程序性细胞死亡受体 1(programmed cell death protein 1，PD-1)为代表的免疫检查点的治疗，已成为一种重要而有效的免疫疗法[2]。

    PD-1 是一种在激活的淋巴细胞上表达的抑制性受体，通过与肿瘤细胞表面表达的程序性细胞死亡配体 1(programmed cell death ligand 1，PD-L1)结合，调节 T 细胞激活，介导肿瘤细胞的免疫逃逸[3-4]。T 细胞免疫球蛋白黏液素 3(T cell immunoglobulin and mucin 3，TIM3)是细胞表面膜蛋白[5-6]，通过与其配体半乳糖凝集素 9(galectin 9，Gal-9)的结合，诱导 T 淋巴细胞耗竭或凋亡[7] ......