葛汝村，李培培，李安娜，徐林，戴晓宇，王换换，李栋

    吸烟者外周血不同T淋巴细胞亚群在体外扩增中的异常增殖及功能研究

    葛汝村，李培培，李安娜，徐林，戴晓宇，王换换，李栋

    250031 济南，山东省立第三医院再生医学研究室(葛汝村、李培培、徐林)；250012 济南，山东大学齐鲁医院低温医学研究室(李安娜、戴晓宇、王换换、李栋)

    检测吸烟对外周血 T 淋巴细胞体外扩增培养过程中免疫杀伤细胞和调节性 T 细胞增殖和功能的不同影响。

    选择平均年龄 30 岁的男性吸烟者 27 例与不吸烟男性健康对照组 16 例，采用密度梯度离心法从外周血中分离淋巴细胞，添加抗 CD3 和抗 CD28 抗体，以及 IL-2 和 IFN-γ 等多种细胞因子扩增培养 15 d，计算细胞的增殖率，并利用流式细胞术检测扩增后各组淋巴细胞中免疫杀伤细胞(CD3+CD8+细胞、CD3+CD56+细胞)以及调节性 T 细胞(CD4+CD25+细胞)的比率；CCK8 法检测扩增后的免疫杀伤细胞对 HeLa 细胞的杀伤力，PCR 方法检测扩增后淋巴细胞部分功能相关基因的表达。

    吸烟者外周血淋巴细胞增殖能力减弱，且免疫杀伤细胞所占比例低，调节性 T 细胞所占比例高；吸烟者细胞免疫杀瘤细胞的杀伤力明显低于不吸烟对照组，吸烟组淋巴细胞表达的 TNF-α、颗粒酶、穿孔素和 IFN-γ 等均有不同程度降低，其中颗粒酶和颗粒溶解素下调较为明显；但吸烟组 TGF-β1 的表达量显著上调，约为对照组的 7 倍。

    吸烟导致扩增后的外周血淋巴细胞中免疫杀伤细胞所占比例减少，调节性 T 细胞比例增加，吸烟组 TGF-β1 的表达增加进一步抑制了免疫杀伤细胞的活化和增殖。

    吸烟； T 淋巴细胞，调节性； 转化生长因子-β； 免疫杀伤细胞

    众所周知吸烟有害健康，中国每年大约12% 的男性死于烟草的使用。烟草含有包括尼古丁在内的 1200 多种有害物质，其中 10 多种为致癌物质，这些有害物质能明显降低人体的免疫功能，降低人体的免疫反应能力[1]，使人易患肺癌、膀胱癌、心脏病等诸多疾病[2-4]。杀伤性 T 淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)与调节性 T 细胞(regulatory T cells，Treg)在机体免疫系统功能中发挥重要作用[5-6]，本研究拟通过比较吸烟者与不吸烟者外周血 T 淋巴细胞在体外扩增中的增殖力、杀瘤力和相关基因的表达，探讨吸烟降低机体免疫功能的可能机制。

    1 材料与方法 ......