杨国威，彭世泽，张永欣，赵建元，岑山

    由结核分枝杆菌感染导致的结核病是一种重大感染性疾病，严重威胁着我国和世界的公共卫生健康[1-3]。虽然异烟肼等抗结核药物可以有效控制药物敏感菌感染引起的结核病，但是由于近年来各种耐药结核菌的不断出现，导致药物治疗失败，结核病发病率逐年上升。因此，亟需发展新型抗结核药物以有效控制结核病的广泛传播[4-7]。

    由于结核分枝杆菌生长缓慢、生物安全等级高，所以结核病动物模型一直是抗结核药物研发的瓶颈问题。由于伦理以及成本等原因，使得灵长类动物难以作为广泛应用的结核病药物筛选及理论研究动物模型[8]。啮齿类动物模型无法完全模拟人感染结核分枝杆菌中的多种病理变化[7,9]，具有相当的局限性。因此，构建理想的体内动物模型对于抗结核药物的研发尤为关键。

    近年来，只具有天然免疫系统的海分枝杆菌-斑马鱼幼鱼模型已经被广泛应用于结核病致病机制以及药物筛选方面的研究，例如结核病肉芽肿的形成与成熟机制等基础研究[10-13]以及依赖荧光的细菌菌数计数法用于药物筛选等[14-15]。不同于斑马鱼幼鱼，斑马鱼成鱼同时具有先天免疫系统以及后天免疫系统。鉴于后天免疫系统在控制结核病方面具有关键的作用[16-17]，海分枝杆菌感染斑马鱼成鱼模型更为接近正常生理状态。目前，尽管海分枝杆菌感染斑马鱼成鱼模型已在结核病致病机制和结核病疫苗等方面的研究中广泛应用[18-19]，但在抗结核药物评价与筛选中的应用鲜有报道。在本研究中，我们建立了海分枝杆菌-斑马鱼成鱼感染模型，并结合 qPCR 菌数计数法，探索其在抗结核药物筛选与评价中的应用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株Mycobacterium.marinumATCC 927 strains 接种于 7H9 液体培养基中，30 ℃、180 r/min 振荡培养至对数生长期。

    1.1.2 实验动物 斑马鱼(Danio rerio)AB 系 ......