李聪，王燕，赵晓丽，王真，蒋建东

    鸦胆子素A诱导非小细胞肺癌细胞株H460凋亡及机制的初步研究

    李聪，王燕，赵晓丽，王真，蒋建东

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院药物研究所(李聪、王燕、蒋建东)，医药生物技术研究所(赵晓丽、王真)

    考察鸦胆子素A(BA)对人非小细胞肺癌细胞系 H460 细胞凋亡的影响和作用机制。

    用 BA 对 H460 细胞进行处理，采用 MTT 法检测细胞增殖情况，并利用 Annexin V-FITC/PI 双染法检测 BA 对 H460 细胞凋亡的影响。Hoechst 33342 染色和免疫荧光染色观察细胞凋亡时染色质的凝集以及 DNA 损伤标志蛋白 γ-H2AX 表达情况。Western blot 和RT-PCR 检测 H460 细胞内凋亡相关蛋白表达水平。

    MTT 结果表明，与对照组相比，BA 能显著抑制 H460 细胞增殖。对 A549、H1299、H1355 三株非小细胞肺癌细胞系进行抑制增殖作用检测，结果显示 BA 对三株细胞系均有不同程度抑制作用。BA 作用 48 h 后，各浓度 BA 处理 H460 细胞凋亡率均高于对照组，具有时间依赖性，差异具有统计学意义。BA 处理组可见明显的染色质凝集，细胞核碎片化，DNA 损伤标志蛋白 γ-H2AX 表达明显增加。Western blot 结果显示，BA 作用 48 h 后，促凋亡蛋白 Bax 表达升高，抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达降低，与对照组相比，Bax/Bcl-2 比值显著升高。同时与对照组相比，凋亡通路中的 cleaved caspase-9、cleaved caspase-3 表达明显增加，并引起凋亡标志蛋白 PARP 切割。RT-PCR 结果显示，BA 处理 H460 细胞后，与对照组相比，Bcl-2 基因表达显著降低。

    BA 能抑制人非小细胞肺癌细胞株 H460 细胞增殖，显著诱导其凋亡，该作用与 BA 引起 DNA 损伤并激活线粒体凋亡通路有关。

    鸦胆子素； 细胞凋亡； 癌，非小细胞肺； H460 细胞

    肺癌是世界上发病率、死亡率最高的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)占到 85%。统计显示，NSCLC 患者 5 年生存率极低(约 15%)，原因是患者早期症状不明显，约有 75% 的患者发现时已处于中晚期[1]，平均生存期仅为 4 个月[2]。目前的治疗方法主要是手术治疗、放化疗、免疫治疗、分子靶向治疗以及药物辅助治疗等[3-4] ......