陈博，张靖溥

    果糖诱导斑马鱼肝脏脂肪变性的转录组学分析

    陈博，张靖溥

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所药理室/卫生健康委员会抗生素重点实验室

    非酒精性脂肪肝(NAFLD)的发病呈低龄化趋势，本研究旨在建立一种模拟低龄人群的高糖诱导的 NAFLD 模型，揭示其基因表达谱特征，为疾病的机制研究和药物筛选提供基础。

    采用高果糖饮食诱导斑马鱼产生肝脏脂肪变性，油红 O 染色分析肝脏脂肪变性率，组织病理学方法观察肝脏脂质堆积，并分析肝脏生化指标变化。利用转录组测序观察基因表达谱变化，通过基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)数据库进行差异基因功能富集，分析其可能影响的信号通路与生物过程。

    斑马鱼幼鱼高果糖喂养 10 d 后发生肝脏脂肪变性，肝脏切片 HE 染色和油红 O染色结果发现，果糖喂饲的幼鱼肝脏出现微小脂质空泡，呈大面积红色着色。肝脏甘油三酯、葡萄糖含量显著高于正常对照组。经转录组测序发现果糖喂饲的幼鱼肝脏表达谱发生明显改变，共发现 485 个差异表达基因(变化倍数 > 3，1 材料与方法

    1.1 材料

    AP100 幼鱼饲料购自美国Zeigler Bros 公司；总胆固醇、甘油三酯、葡萄糖检测试剂盒购自北京普利莱科技有限公司；Trizol 试剂盒购自美国 Invitrogen 公司；SZX10 型显微镜购自日本Olympus公司；RM2255 型石蜡切片机和CM1950型冰冻切片机均购自德国Leica 公司；LightCycler 96 荧光实时定量 PCR 仪购自瑞士Roche公司。

    1.2 方法

    1.2.1 斑马鱼饲养 AB 系斑马鱼，饲养温度(28.5 ± 1)℃，14 h 光照/10 h 黑暗循环。斑马鱼胚胎培养至受精后5 d(5 dpf)，给予不同饮食喂饲：对照组给予 30 mg/d AP100，果糖组给予 30 mg/d AP100 和 0.25%(w/v)果糖，从 5 dpf 继续培养至 10 dpf。所有斑马鱼在实验结束前禁食过夜。

    1.2.2 斑马鱼整体油红 O 染色 参考文献[6]的方法，斑马鱼浸泡在 4% 多聚甲醛中固定过夜，PBS 清洗两次 ......