周小剑，李玉华，唐湘，吕钰冰，周嘉彬

    乌头碱抑制食管癌EC-1细胞增殖与侵袭并诱导其凋亡作用研究

    周小剑，李玉华，唐湘，吕钰冰，周嘉彬

    511436 广州市番禺区新造医院检验科(周小剑、李玉华、唐湘)；511400 广州市番禺区中心医院检验科(吕钰冰、周嘉彬)

    研究乌头碱对食管癌 EC-1 细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。

    CCK8 法及克隆形成抑制实验检测乌头碱对食管癌 EC-1 细胞的生长抑制作用；采用 Hoechst 33258 染色检测乌头碱对 EC-1 细胞凋亡的影响；Transwell实验观察乌头碱对细胞侵袭能力的作用；Western blot 检测药物作用后细胞侵袭及凋亡相关蛋白的表达情况。

    CCK8 实验结果显示，乌头碱可明显抑制食管癌 EC-1 细胞增殖，并呈时间和剂量效应(

    图 1 乌头碱的结构

    Figure 1 Structure of aconitine

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 细胞株 人食管癌 EC-1 细胞由中山大学附属肿瘤医院肿瘤防治中心惠赠，用含 10%的胎牛血清、1% 链霉素(100 μg/ml)和青霉素(100 U/ml)的 DMEM 培养基培养于 37 ℃、5% CO2培养箱内。取对数生长期的细胞用于实验。

    1.1.2 试剂 乌头碱购自中国食品药品检定研究院，批号 112019-201601；DMEM 培养基、0.25% 胰酶、胎牛血清购自美国 Gibco 公司；CCK8试剂盒购自日本同仁公司；Transwell 小室及基质胶均购自广州蓝吉生物科技有限公司。

    1.1.3 主要仪器 CO2培养箱和 Bio-Tek 酶标仪 ELX-800 购自美国Biotech 公司；1300B2 生物安全柜购自美国 Thermo 公司；DMI4000 倒置荧光显微镜购自德国 Leica 公司；750D 照相机购自日本 Canon 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 CCK8 检测细胞增殖 取对数生长期的人食管癌 EC-1 细胞，0.25% 胰酶消化后制成细胞悬液，调整细胞密度至 5 × 104/ml，细胞悬液移至96 孔板，每孔 200 μl，预培养 24 h 待细胞贴壁良好。实验设空白对照组(只含培养基，不含细胞)、阴性对照组(不加入药物)及药物处理组(乌头碱浓度分别为 0.8、1.6、3.2、6.25、12.5、25.0 μg/ml) ......