张雨，王可洲，郭中坤，聂爱蕊

    CRISPR/Cas9基因编辑技术及其在肿瘤免疫治疗中的应用

    张雨，王可洲，郭中坤，聂爱蕊

    250200 济南大学/山东省医学科学院医学与生命科学学院(张雨、王可洲、郭中坤、聂爱蕊)；250002 济南，山东省实验动物中心/山东第一医科大学(山东省医学科学院)(张雨、王可洲、郭中坤、聂爱蕊)；276023 山东，临沂市第三人民医院药剂科(聂爱蕊)

    肿瘤的治疗依旧是医学上的难题，由于其发生发展复杂，往往伴随着免疫逃逸和免疫抑制性肿瘤微环境的形成，且肿瘤细胞易于扩散和迁移[1]。因此，阻止肿瘤细胞的免疫逃逸是一项重要的治疗途径。肿瘤免疫治疗是指通过增强特异性免疫细胞对肿瘤的防御能力，并阻遏其他调节性免疫细胞对肿瘤的保护作用[2]，从免疫防御的角度来控制肿瘤细胞的生长及扩散。肿瘤免疫疗法的出现备受关注，是癌症治疗领域的最具前景的研究方向，更多的肿瘤免疫治疗药物已进入临床试验阶段及市场，使癌症的治疗有了新的选择。另外，为加强 T 细胞的特异性免疫原性而对其进行基因修饰以提高其对肿瘤细胞的杀伤作用的研究方法已取得了重大的进展[3]。

    基因编辑技术是对某一核苷酸序列中的特定基因位点进行人为改变，插入、删除、替换或修饰基因组中的特定目的基因使其表达性状改变的一种新兴分子生物技术[4]。簇状规则间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR)/ CRISPR 相关基因 9(CRISPR-associated genes 9，Cas9)作为一种新兴的基因编辑技术，具有简单高效的靶向基因编辑能力，被广泛应用于肿瘤治疗领域[5]，并极大促进了肿瘤免疫治疗研究的发展。本文就 CRISPR/Cas9 技术的背景、原理及此基因编辑技术在肿瘤免疫治疗方面的应用进行综述，讨论基因编辑技术在此领域的研究进展。

    1 CRISPR/Cas9 基因编辑原理

    CRISPR/Cas 系统是一种普遍存在于古细菌和细菌基因组中的适应性免疫系统[6]，其序列特点最先于 1987 年由日本学者发现。直到 2008 年该系统才被研究证明能够以类似于真核细胞中 RNA 干扰(RNAi)的方式抵御外源微生物或质粒的侵袭[7]。2012 年，由 RNA 介导的基因组编辑技术 CRISPR/Cas9 正式建立，并完成了在哺乳动物细胞中的基因组编辑[8]。

    CRISPR/Cas9 基因编辑系统是根据II型原核生物的 CRISPR/Cas9 系统演变而来[9] ......