谷海燕，律苗，丁玲，马萌，张楠，李拓，李娜

    疫苗用原辅料中猪源性病毒PCR检测方法的建立

    谷海燕，律苗，丁玲，马萌，张楠，李拓，李娜

    100176 北京生物制品研究所有限责任公司质量检定室(谷海燕、律苗、丁玲、马萌、李拓、李娜)，疫苗 5 室(张楠)

    猪源性病毒是一类广泛寄生于猪体内的病毒，其不只感染猪，对人和多种哺乳动物也能造成感染，并可能致病[1-2]。2015 版《中国药典》要求[3]，制备疫苗用的动物细胞需要检测猪源性病毒为阴性。目前生物制品中越来越多涉及到猪来源的原料或辅料，如疫苗生产中使用的胰蛋白酶和水解乳蛋白及明胶等。虽然目前法规并未将猪源性病毒纳入原辅料质控，但是一些猪来源原辅料有携带猪源性病毒的风险，其中包括猪圆环病毒 1(porcine circovirus 1，PCV1)、猪圆环病毒 2(porcine circovirus 2，PCV2)及猪细小病毒(porcine parvovirus，PPV)。确保生产用原辅料不携带猪源性病毒是生产出合格疫苗产品的保证，因此质控原辅料中猪源性病毒至关重要。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 病毒、细菌、质粒、胰蛋白酶及水解乳蛋白 大肠杆菌(批号：2017053104-3)、金黄色葡萄球菌(批号：2017053104-3)、麻疹病毒标准品(批号：20150902213)、风疹病毒标准品(批号：2015S0401)及所有标准菌毒株均购自中国食品药品检定研究院；水解乳蛋白(批号：1833902)和胰蛋白酶(批号：C01171008)均购自美国 Gibco 公司。PCV1、PCV2、PPV 阳性质粒由生工生物工程(上海)股份有限公司合成构建。

    1.1.2 主要试剂及仪器 胰蛋白酶和酵母提取物购自美国 Oxid 公司；Taq DNA 聚合酶购自日本 Takara 公司；DNA marker、Gel-red、病毒 DNA/RNA 提取试剂盒、质粒小提试剂盒均购自天根生化科技有限公司；琼脂糖和氯化钠购自国药化学试剂有限公司；PCR 仪、电泳仪、凝胶成像系统为美国 Bio-Rad 公司设备。

    1.2 方法

    1.2.1 基因组合成 根据 GenBank 中的登录号，PCV1(GenBank：AY193712.1)合成其 929 ~ 1655 bp 位点核酸序列，PCV2(GenBank：AY181946.1)合成其 1151 ~1584 bp 位点核酸序列，PPV(NC：001718)合成其 3001 ~ 3531 bp 位点核酸序列 ......