姜华，文海若，刘丽，颜玉静，霍艳

    基于流式细胞术的淋巴细胞亚群分类试验条件比较

    姜华*，文海若*，刘丽，颜玉静，霍艳

    100176 北京，中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室

    比较不同抗体稀释度和多聚甲醛浓度对流式细胞术测定淋巴细胞亚群分类结果的影响。

    取猴抗凝全血经浓度为 1% 或 4% 的多聚甲醛固定后连续4 d 上机测定淋巴细胞荧光强度及 CD3+、CD4+、CD8+、CD20+百分率及 CD4+/CD8+比值。取猴抗凝全血 50 μl 分别与1、3、5 和 10 μl CD8+-FITC、CD4+-PE、CD3+-PerCP 抗体混合后连续 7 d 上机测定 CD4+和 CD8+荧光强度及 CD4+与 CD8+百分率和 CD4+/CD8+比值。

    经 1% 多聚甲醛固定至第 4 天检测雄性动物 CD4+、CD8+、CD3-CD20+百分率和雌性动物 CD8+百分率与样本制备当天相比存在显著性差异(1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 普通级食蟹猴共 34 只，雌雄各半，购入时 3 ~ 4 岁，购自广西雄森灵长类实验动物养殖开发有限公司。动物生产许可证号 SCXK(桂)2011-0002 和 SCXK(桂)2016-0001。饲养于普通级动物房不锈钢笼具内，单笼饲养。动物自由饮水，每只动物每天定量给料和水果各 150 g，自由摄取。食蟹猴饲养于恒温(16 ~ 26 ℃)、恒湿(40% ~ 70%)的条件下，明暗周期为 12 h，每小时最低换气次数 8 次。所有研究方案均通过国家药物安全评价监测中心实验动物福利伦理委员会(IACUC)的伦理审查。

    1.1.2 主要试剂和仪器 流式仪校准微球(BD CalibriteTM3-color、APC bead)、流式检测抗体FITC-CD8(Clone RPA-T8，批号：37124)、PE-CD4(Clone L200，批号：17206)、PerCP-CD3(Clone SP34-2，批号：2230514)、APC-CD20(Clone 2H7)均购自美国 BD 公司；红细胞裂解液主要成分：氯化氨(批号：20080228)、碳酸氢钾(批号：F20101109)、乙二胺四乙酸二钠(批号：20100324)和多聚甲醛(批号：20111121)购自国药集团；磷酸盐缓冲液(批号：AD2016267、AD22391274)购自美国 Hyclone 公司；多聚甲醛使用前经 PBS 稀释为 1% 或 4% 的应用液 ......