苏华振，魏明

    寻常型银屑病皮损中Notch1表达及对体外培养HaCaT细胞的影响

    苏华振，魏明

    450052郑州大学第五附属医院药学部

    研究 Notch1 在寻常型银屑病皮损中的表达及对体外培养永生化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖、凋亡的影响，探究其可能存在的发生机制。

    收集 30 例寻常型银屑病患者病患处的皮肤组织和 30 名健康人的皮肤组织，应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术(Western)测定皮肤组织 Notch1、Jagged1 mRNA 和蛋白表达量；将HaCaT 细胞随机分为激活剂组(2 μg/ml Jagged1-Fc 融合蛋白)、抑制剂组(20 μmol/L DAPT)和空白对照组，体外培养。用细胞计数(CCK-8)法检测 HaCaT 细胞增殖，用流式细胞术测定人 HaCaT 细胞的凋亡情况，用 Western 印迹技术检测HaCaT 细胞内凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)、involucrin、keratin1 蛋白表达。

    寻常型银屑病病人病患处的表皮组织中 Jagged1、Notch1 mRNA 及蛋白表达量均高于健康人皮肤组织(值分别为 4.26、4.78 和 5.12、4.23，值均1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 皮肤部位标本来源 选取看诊于郑州大学第五附属医院寻常型银屑病病患的皮肤组织标本 30 例，标本都经皮肤组织病理学检查并确诊。其中男性 20 例、女性 10 例，年龄 18 ~ 67(32.8 ± 7.1)岁。其入选标准：皮肤病患处近 2 周没有外涂抹任何药物，最近 1 个月内没有接受任何免疫抑制性或其他种类药物的治疗。排除标准：年龄小于 18 岁或大于 67 岁；伴发有皮肤性肿瘤及另外增生性的皮肤病；有肝、肾、心脑血管及血液系统等较为严重的原发性或继发性疾病以及另外情况不方便取材的患者。选择本院同时期整形外科和泌尿外科手术切除多余的健康人的皮肤组织 30 例，其中男性 19 例、女性 11 例，年龄 18 ~ 67(32.6 ± 6.9)岁。两组年龄、性别相比差异无统计学意义(> 0.05)。两部分皮肤组织中皮下的脂肪和皮下的结缔组织被刮除后，放于液氮中冷冻，–80 ℃的冰箱中放置保存。

    1.1.2 细胞、试剂和仪器 人类永生化角质形成细胞系：HaCaT 细胞株由中国科学院细胞库保存。特异性 Notch 信号通路激活剂(Jagged1-Fc 融合蛋白)和特异性 Notch 信号通路抑制剂(DAPT)购自美国 R&D System公司；Trizol、逆转录实验试剂盒购自日本 Takara 公司；Jagged1、Notch1、B 淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、角蛋白 1(keratin1)和重组人外皮蛋白(involucrin)单克隆抗体购自美国Abcam 公司；辣根过氧化物标记的二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司；DMEM 培养基、100 μg/ml 藻红蛋白(PE)、Annexin-V-FITC、β-肌动蛋白(β-actin)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色液均购自美国 Sigma 公司；CCK-8 实验试剂盒购自普洛麦格北京生物技术有限公司；二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒、胎儿牛血清(FBS)购自杭州四季青生物工程材料研究所 ......