王赟，毕春潮，樊苗苗，赵晓霞

    论著

    TNF-α和IL-6在高原地区翼状胬肉组织中的表达研究

    王赟，毕春潮，樊苗苗，赵晓霞

    探讨高原地区与平原地区翼状胬肉组织中TNF-α 和 IL-6 的表达情况。

    免疫组织化学法和 Western blot 法检测 29 例平原地区和 29 例高原地区翼状胬肉患者切除的翼状胬肉组织中的 TNF-α及 IL-6 的表达。

    免疫组织化学法结果显示，TNF-α 位于结膜上皮细胞基底膜和胞浆，IL-6 位于结膜上皮细胞、增生的纤维组织内及血管旁炎症细胞胞浆中。TNF-α 在高原组的阳性表达率(86.21%)显著高于在平原组中的阳性表达率(58.62%)，差异具有统计学意义(1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 临床资料 高原组：采集 2017 年 6 月~ 2018 年 10 月期间西宁市第一人民医院就诊的翼状胬肉患者行胬肉切除术 29 例，其中男 12 例，女 17 例，年龄 30 ~ 55 岁，平均年龄(44 ± 3.45)岁。平原组：采集 2017 年 6月~ 2018 年 11 月期间西安市第四医院就诊的翼状胬肉患者行胬肉切除术 29 例，其中男 16 例，女 13 例，年龄30 ~ 55 岁，平均年龄(50 ± 5.24)岁。术中沿翼状胬肉头部外约 1 mm 透明角膜处开始浅层剖切，尽量不破坏翼状胬肉头、颈、体部表面的上皮组织。切除后迅速用 10% 甲醛固定，另外部分液氮速冻待用。

    1.1.2 试剂与仪器 兔抗人 TNF-α、IL-6 多克隆抗体购自英国 Abcam 公司；sp-9002免疫组化试剂盒(包括封闭用山羊血清、生物素、标记二抗和辣根酶标记链霉卵白素)购自北京中杉生物技术有限公司；BCA 试剂盒、ECL 发光液、PVDF 膜、SDS 凝胶配制试剂盒、RIPA 裂解液均购自福州迈新生物技术公司；石蜡切片机购自德国 Leica 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 免疫组织化学染色法 手术取出翼状胬肉组织甲醛溶液固定，脱水，石蜡包埋及连续切片，厚度 4 μm，切片 65 ℃固定 6 h，取出自然冷却后依次用二甲苯和乙醇脱蜡和水化，PBS 冲洗干净后，3% 过氧化氢溶液孵育 20 min，蒸馏水清洗 5 min，PBS 润洗 5 min，浸于柠檬酸钠缓冲液置入高压水浴锅内热修复，PBS 洗 3 次，每次 5 min。滴加一抗，37 ℃孵育 30 min 后，切片 4 ℃过夜 ......