杨守云，肖艳

    论著

    RAI1脱敏干预影响变应性鼻炎大鼠模型ECP表达和Th1-Th2分化的机制

    杨守云，肖艳

    探究探针 RAI1 脱敏干预影响变应性鼻炎大鼠模型 ECP 表达和 Th1-Th2 分化的机制

    卵白蛋白(OVA)诱导雌性 Sprague-dawley 大鼠构建过敏性鼻炎(AR)模型。并进行构建沉默 RAI1 mRNA 质粒载体，脑内注射至AR 模型大鼠体内。通过蛋白质印迹法检测 Th1-Th2 相关因子的蛋白表达情况；通过 qRT-PCR 分析各组大鼠中维甲酸诱导蛋白 RAI1 的 mRNA 表达情况；通过记录大鼠鼻炎行为评估变应性鼻炎症状；通过酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清中 ECP、IgE 含量。

    大鼠搔鼻挠嘴、打喷嚏行为 AR 模型组较对照组、RAI1 干预组频繁(1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 无特定病原体等级Sprague-dawley 大鼠，雌性，3 月龄，体重 220 ~ 240 g。22 ℃，12 h 光照/ 12 h 黑暗循环下饲养，随意获取食物和水。所有实验程序均经动物保护和使用委员会批准，并根据实验动物护理和使用指南进行实验。

    1.1.2 其他材料 OVA 购自美国 Sigma 公司；氢氧化铝购自苏州市协昌化学试剂有限责任公司；沉默 RAI1 mRNA 质粒载体购自上海赛默飞世尔科技有限公司；SYBR Green 核心反应试剂盒购自美国应用生物系统公司；PVDF 膜购自美国 BioTrace 公司；ECL 检测试剂盒、ECP Elisa 检测试剂盒和 IgE ELISA 检测试剂盒均购自上海碧云天生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 AR 大鼠模型构建及 RAI1 沉默表达载体构建 参照文献[7]构建由卵白蛋白(OVA)诱导的大鼠AR 模型。实验大鼠适应实验室条件后，用OVA(0.3 mg 腹腔注射)致敏，每 2 天腹腔注射氢氧化铝 30 mg，共计给药 14 d(D1 ~ D14)。第15 天起，每天鼻内滴注 10 μl 10% OVA，连续 7 d，第 22 天起，每隔一天继续鼻内施用10 μl 10% OVA 以维持过敏体征。

    1.2.2 大鼠 RAI1 沉默表达载体构建 用浓缩的包装高滴度慢病毒颗粒对 OVA 诱导的 AR 模型脑内注射，将最终浓度调节至 1 × 1010TU/ml。慢病毒可以通过相应的穿梭质粒干扰靶基因的表达和生物活性 ......