闫媛媛，刘平

    论著

    牛蒡子苷调控血管内皮生长因子抑制糖尿病视网膜病变的机制研究

    闫媛媛，刘平

    450003 河南，郑州人民医院眼科

    探讨牛蒡子苷(Arc)是否通过调控血管内皮生长因子(VEGF)表达进而抑制糖尿病视网膜病变。

    体外培养人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)，用不同浓度的 Arc 处理 HRCECs，同时将 si-VEGF 或 pcDNA3.1-VEGF 分别转染入 HRCECs，MTT 法检测HRCECs 增殖能力；Western blot 检测 p21、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、载脂蛋白 M(ApoM)、VEGF 蛋白表达。

    与 LG 组相比，HG 组 HRCECs 的值明显升高(1 材料与方法

    1.1 材料

    HRCECs 细胞购自上海妙顺生物科技有限公司；si-VEGF 及其阴性对照均购自上海吉凯基因化学公司；牛蒡子苷购自成都尚科药业有限责任公司；D-葡萄糖、胎牛血清(FBS)、DMEM 培养基均购自美国 Sigma 公司；蛋白提取试剂盒购自上海贝博生物科技有限公司；蛋白印迹(Western blot)实验所需相关试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司；噻唑蓝(MTT)购自广州朗日生物技术有限公司；鼠抗人 TNF-α、MCP-1、ApoM 单克隆抗体均购自武汉友联特生物技术有限公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠 IgG 二抗购自美国 Proteintech 公司；p21、cyclinD1、VEGF 一抗均购自美国 Santa Cruz 公司；Lipofectamine2000 转染试剂购自美国 Invitrogen 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 HRCECs 培养及实验分组 常规复苏 HRCECs，培养于含有 10% FBS 与 5.5 mmol/LD-葡萄糖的 DMEM 培养基，放入 37 ℃、5% CO2培养箱内，稳定传代后将细胞分为 5 组，LG 组：用 5.5 mmol/L D-葡萄糖的 DMEM 培养基培养；HG 组：用 30 mmol/L 葡萄糖培养细胞[8]；HG + Arc 20 mg/L 组：用浓度为 20 mg/L 的牛蒡子苷处理细胞，并用高糖培养基培养；HG + Arc 30 mg/L 组：浓度为 30 mg/L 的牛蒡子苷处理细胞，并用高糖培养基培养；HG + Arc 40 mg/L 组：浓度为40 mg/L 的牛蒡子苷处理细胞 ......