米一，王立华，李欣，王皓，张晨亮，马静，苗丽，刘拥军，刘广洋

    ·论著·

    SPD-TRAIL基因修饰间充质干细胞及其杀伤肺腺癌细胞的研究

    米一，王立华，李欣，王皓，张晨亮，马静，苗丽，刘拥军，刘广洋

    100176 北京贝来生物科技有限公司(米一、李欣、王皓、张晨亮、马静、苗丽、刘拥军、刘广洋)；100176 北京市亦创生物技术产业研究院干细胞与再生医学研究所(米一、李欣、王皓、张晨亮、马静、苗丽、刘拥军、刘广洋)；053600 石家庄，河北医科大学第二医院血液科(王立华)

    通过基因工程手段构建了可高表达十二聚体 TRAIL的间充质干细胞(MSC)，以期为临床应用以 MSC为载体的肿瘤靶向治疗提供新的实验方法。

    通过基因工程手段改造 TRAIL 基因序列，在其 N-末端增加肺表面活性蛋白-D(SPD)结构域，使其形成稳定构象的十二聚体 TRAIL 蛋白，采用慢病毒载体基因转染间充质干细胞，得到可高表达 TRAIL 蛋白的 SPD-TRAIL-MSC 种子细胞。在此基础上对基因修饰细胞进行功能学检测。

    基因修饰后 MSC 流式表型、分化能力均未有显著变化；SPD-TRAIL-MSC 及 TRAIL-MSC(对照组细胞)均可高表达 TRAIL 蛋白，而 SPD-TRAIL-MSC 表达的 TRAIL 蛋白显著高于对照组细胞(1 材料与方法

    1.1 材料

    人肺癌细胞 A549 购自中国医学科学院基础医学研究所；DMEM 高糖培养液、DMEM/F-12 培养液、胎牛血清、胰蛋白酶及成骨、成脂分化培养液等均购于美国 Thermo Fisher 公司；第四代慢病毒载体系统购自美国 Origene 公司；TRAIL 蛋白ELISA 检测试剂盒购于美国 R&D System 公司；CCK8 试剂盒及 Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒购于日本东仁化学科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 脐带间充质干细胞获取及检测 人脐带组织来源于合作妇产科医院剖腹产出生的健康胎儿。选择健康供者脐带组织，将脐带组织剪至直径为1 ~ 1.5 mm 的小段，采用贴壁培养法获取原代脐带间充质干细胞(UC-MSCs)。待细胞融合度为 80% 后，对细胞进行蛋白酶消化和计数，并将细胞按1 × 104/cm2接种至新的培养瓶。按同样方法将细胞扩增至 P2代，冻存。

    1.2.2 SPD-TRAIL 质粒构建及病毒转染间充质干细胞 按照文献[6]所述方法 ......