王静，戴成祥，李萍，沈美萍，李苏克，刘必佐

    ·论著·

    SB431542对人羊膜上皮细胞上皮间质转化的影响

    王静*，戴成祥*，李萍，沈美萍，李苏克，刘必佐

    201210 上海赛比曼生物科技有限公司

    探讨通过添加 TGF-β 抑制剂 SB431542控制人羊膜上皮细胞的干性、表型和间质特性，为SB431542 在预防人羊膜上皮细胞上皮间质转化(EMT)中的作用提供依据。

    使用不同浓度 SB431542 培养 P2 代人羊膜上皮细胞，通过细胞的增殖曲线和基因水平(CK8、ACTA2、OCT4 和 KLF4)表达的差异，筛选出最适浓度。以不加 SB431542 的细胞为对照组，以加最适浓度的 SB431542 为实验组，比较不同代次的对照组和实验组的细胞倍增时间，基因表达水平(CK8、CK19、OCT4、KLF4、Vimentin、ACTA2)，流式检测细胞表面标志物(CD146、CD105、SSEA4)和免疫荧光检测细胞蛋白表达情况(CK8、ACTA2、EpCAM)的差异。

    使用不同浓度 SB431542 培养 P2 代人羊膜上皮细胞，5 μmol/L SB431542 培养条件下的细胞增殖曲线最优，且基因水平(CK8、ACTA2、OCT4 和 KLF4)表达最优，最终筛选最适药物浓度为 5 μmol/L SB431542 完成后续实验。在 5 μmol/L SB431542 培养条件下，P7 代实验组的细胞倍增时间优于对照组；P7 代实验组细胞的 CK8、CK19、KLF4、OCT4 的表达水平明显高于对照组细胞的表达水平，实验组的 ACTA2(α-SMA)和 Vimentin 表达水平明显低于对照组细胞的表达水平；P3 和 P5 代细胞的实验组的间充质标志物 CD146、CD105 的表达量均比对照组的低，实验组干细胞标志物 SSEA4 的表达量均比对照组的高；P7 代实验组的 CK8 和 EpCAM 表达效果强于 P7 代对照组细胞，且 P7 代实验组的 α-SMA 基本不表达。

    5 μmol/L SB431542 在人羊膜上皮细胞体外培养7 个代次以内可以有效地抑制其上皮间质转化的发生。

    人羊膜上皮细胞； TGF-β； SB431542； 上皮间质转化； 干细胞

    羊膜是位于胎儿胎盘内侧的一层薄膜。人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells，hAECs)表达多种胚胎干细胞表面标志物：肿瘤排斥抗原 TRA1-60、TRA1-81 ......