尹杨峰，蒋磊

    ·论著·

    千金藤素通过MAT2B调节MAPK信号通路对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

    尹杨峰，蒋磊

    230001 合肥，安徽省第二人民医院药学部

    研究千金藤素对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其分子机制。

    不同浓度的千金藤素作用于宫颈癌细胞 SiHa 后，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力变化，流式细胞术检测细胞凋亡，实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)和 Western blot 检测 MAT2B表达水平的变化，确定最佳药物浓度。将蛋氨酸腺苷转移酶 2B(MAT2B)小干扰 RNA(si-MAT2B)转染 SiHa 细胞，检测细胞活力和凋亡情况。将 MAT2B 过表达载体(pcDNA-MAT2B)转染 SiHa 细胞，经千金藤素处理后，检测细胞活力、凋亡情况以及磷酸化的 p38 分裂原激活蛋白激酶(p-p38 MAPK)和磷酸化细胞外信号调节激酶 1/2(p-ERK1/2)表达变化。

    在不同给药时间下，随着千金藤素浓度的增加，SiHa 细胞活力逐渐降低，细胞凋亡率逐渐升高，MAT2B 的表达水平逐渐降低，确定 20 mg/L 为最佳有效浓度。si-MAT2B 转染后 SiHa 细胞活力显著降低，细胞凋亡率显著升高(1 材料与方法

    1.1 材料

    人子宫颈鳞癌 SiHa 细胞购于武汉普诺赛生命科技有限公司；DMEM 培养基、胎牛血清和青链霉素双抗购于美国 Gibco 公司；千金藤素(纯度 > 98%，CAS 号 481-49-2)和紫杉醇(paclitaxel，PTX，纯度 > 98%，CAS 号 33069-62-4)购于上海源叶生物有限公司；小干扰 RNA 对照(si-con)、MAT2B 小干扰 RNA(si-MAT2B)、空载体(pcDNA)、MAT2B 过表达载体(pcDNA-MAT2B)以及 PCR 引物均由上海吉玛公司提供；四甲基偶氮唑蓝(MTT)试剂盒、膜联蛋白 V 异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒购于北京索莱宝生物科技公司；Trizol 试剂、RIPA 细胞裂解液、二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜购于上海碧云天生物科技有限公司；兔源 MAT2B 抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔II 抗购于武汉菲恩生物科技有限公司；兔源 p38 分裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)、磷酸化的 p38 MAPK(p-p38 MAPK)、磷酸化的 ERK1/2(p-ERK1/2)、肌动蛋白(β-actin)抗体购于美国 CST 公司 ......