郭延兵，姚庆和，王新军

    ·论著·

    miR-495-3p通过调控HDAC9表达对缺氧/复氧诱导的神经细胞凋亡及炎症反应的影响

    郭延兵，姚庆和，王新军

    471009 洛阳，郑州大学附属洛阳中心医院神经外科(郭延兵、姚庆和)；470000，郑州大学第五附属医院神经外科(王新军)

    探讨微小 RNA-495-3p(miR-495-3p)对缺氧/复氧(H/R)诱导的神经细胞凋亡及炎症反应的影响及机制。

    体外培养神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH，建立 H/R 损伤细胞模型。实验分组：Con 组、H/R 组、H/R + miR-NC 组、H/R + miR-495-3p 组、H/R + si-NC 组、H/R + si-HDAC9 组、H/R + miR-495-3p + pcDNA 组、H/R + miR-495-3p + pcDNA-HDAC9 组。采用qRT-PCR与Western blot分别检测细胞中 miR-495-3p、组蛋白去乙酰化酶 9(HDAC9)的表达；采用膜联蛋白 V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡情况；采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素 6(IL-6)水平；双荧光素酶报告基因检测 miR-495-3p 与 HDAC9 的靶向关系；Western blot 检测 B 淋巴细胞瘤-2 相关蛋白(Bax)、B 淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。

    与 Con 组比较，H/R 组神经细胞中 miR-495-3p 的表达水平显著降低(1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH 购自美国 ATCC公司；RPMI1640 培养基购自上海康朗生物科技有限公司；miR-495-3p 模拟物(mimics)及阴性对照(miR-NC)、HDAC9 小干扰 RNA(si-HDAC9)、乱序无意义阴性对照序列(si-NC)、miR-495-3p 特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-495-3p)及其阴性对照(anti-miR-NC)均购自广州锐博生物科技有限公司；pcDNA3.1 购自上海索宝生物科技有限公司；Lipofectamine2000 购自上海阳光生物科技有限公司；膜联蛋白 V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)细胞凋亡试剂盒购自大连美仑生物技术有限公司；Trizol、反转录及荧光定量 PCR 试剂均购自美国 Thermo Fisher 公司；TNF-α、IL-1β、IL-6 检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；RIPA 裂解液、二喹啉甲酸(bicinchoninicacid ......