孟月，王丹，王雪蕾，郭晓茹，夏桂民

    ·论著·

    建立共载米铂与核酸miR-34a阳离子脂质体中miR-34a的含量测定方法

    孟月，王丹，王雪蕾，郭晓茹，夏桂民

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所制剂室

    建立共载米铂与核酸 miR-34a 阳离子脂质体中 miR-34a 的含量测定方法，分析检测 miR-34a 的包封率。

    选用 RiboGreen-荧光分光光度法分析测定共载脂质体中 miR-34a 的含量，并对建立的方法进行方法学研究与验证。

    建立的 RiboGreen-荧光分光光度法，最佳激发和发射波长分别为 485 和 535 nm；miR-34a 在 0.5 ~ 100.0 nmol/L范围内线性关系良好(= 6538+ 687.1，= 0.9998)；低、中、高 3 种浓度的平均回收率分别为98.23%(RSD = 1.88%，n = 3)、99.40%(RSD = 1.51%，n = 3)和99.03%(RSD = 1.28%，n = 3)；日内精密度 RSD = 1.80%(n = 6)，日间精密度 RSD = 0.99%(n = 6)。制备的连续 3 批共载脂质体中 miR-34a 的浓度分别为 4.99、5.01 和 4.92 μmol/L，包封率分别为 99.0%、99.1% 和 99.1%。

    本文建立的方法简便易行、重复性好、准确度高，可用于共载脂质体中 miR-34a 的含量和包封率分析测定。

    RiboGreen-荧光分光光度法； 含量测定； miR-34a； 阳离子脂质体

    肿瘤的发生、发展和复发与基因密切相关，抗肿瘤核酸药物可通过调节相关基因的表达实现抗肿瘤效果。核酸药物因易被核酸酶降解而不稳定，将其制备成阳离子纳米脂质体是解决此类问题的有效途径之一。铂类药物具有广谱抗肿瘤作用，miR-34a 也具有广泛的抗肿瘤活性，两者的作用靶点不同，联合给药可以多靶点抑制肿瘤细胞的生长，利于控制或消除肿瘤的发展和(或)复发等。本课题组构建了共载米铂与核酸 miR-34a 的阳离子脂质体，以期实现较好的抗肿瘤效果。

    目前，核酸药物的定量检测方法主要有紫外分光光度法、凝胶电泳法和荧光分光光度法。利用核酸分子在 260 nm 处具有最大吸收峰，可采用紫外分光光度法进行定量分析[1]，该法操作简便，是实验室常用的核酸定量方法。但该法灵敏度低，且易受到被检样品中其他杂质的干扰，准确度低，常常不适用于纳米制剂中核酸药物的定量检测[2] ......