章毅，陈侃俊，伍婷，张晗，祁成，孔凡瑞，陈亮，胡肖希，李品宙

    ·论著·

    人脐带间充质干细胞对HaCaT细胞增殖与迁移的影响

    章毅*，陈侃俊*，伍婷，张晗，祁成，孔凡瑞，陈亮，胡肖希，李品宙

    200051 上海市脐带血造血干细胞库/上海市干细胞技术有限公司/中国干细胞集团有限公司

    探讨人脐带间充质干细胞(hucMSCs)对人表皮角质形成细胞增殖与迁移的影响及其可能机制。

    采用 II 型胶原酶消化法从新生儿脐带中分离制备 hucMSCs，用流式细胞术鉴定 P3 代 hucMSCs 表面标记抗原，用油红 O 染色、茜素红 S 染色和 Masson 染色进行间充质干细胞三向分化能力鉴定；以人表皮角质细胞系HaCaT 为研究模型，在 transwell 上室接种 P3 代 hucMSCs进行共培养，显微镜观察24、48 和 72 h 时 HaCaT 的细胞形态，CCK8 法检测细胞增殖状况，划痕法检测细胞 12 h 和 24 h 迁移率，qRT-PCR 法测定 HaCaT 细胞迁移、增殖相关生长因子 KGF-2、FGFR-2、TGF-β1，以及细胞外基质蛋白 Fibronectin、MMP-1 和 Collagen I mRNA 表达水平。

    hucMSCs 呈成纤维细胞样贴壁生长，其表面间充质干细胞标志性抗原 CD105、CD90、CD73 阳性表达率分别为 98.35%、99.97% 和 99.94%，不表达 CD45、CD34、CD14 和 CD19，在诱导培养 16 d 后出现明显的成脂、成骨和成软骨细胞特性。hucMSCs 共培养 24、48 和72 h，HaCaT 细胞存活率较对照组分别显著增加了(20.42 ± 3.90)%(= 0.002)、(36.30 ± 8.08)%(= 0.001)和(27.31 ± 10.04)%(= 0.012)，与形态学观察结果一致。划痕后继续培养 12 h，对照组、共培养组 HaCaT 的空白区域面积分别为(36354.19 ± 1705.32)μm2、(29497.63 ± 1286.49)μm2(= 0.045)，培养 24 h，其空白区域面积分别减少为(13086.65 ± 1695.85)μm2、(2895.69 ± 224.32)μm2(= 0.014)。qRT-PCR 结果显示，共培养处理 24 h 后 hucMSCs 组 KGF-2、TGF-β1 基因表达分别上调为对照组的 1.24 倍和 1.92 倍；共培养 48 h 后 KGF-2、TGF-β1 和 FGFR-2 分别上调 2.01 倍、2.26 倍和 1.34 倍 ......