张文新，黄传峰，孙楠，高飞，胡泽斌，孙晶，黄杰，曲守方

    ·论著·

    肿瘤基因突变检测的标准化研究

    张文新*，黄传峰*，孙楠，高飞，胡泽斌，孙晶，黄杰，曲守方

    100050 北京，中国食品药品检定研究院非传染病诊断试剂室(张文新、孙楠、高飞、胡泽斌、孙晶、黄杰、曲守方)；理化检测室(黄传峰)

    探索制备和等肿瘤基因突变参考品的方法，用于评价肿瘤基因突变检测试剂盒(二代测序法)的性能。

    收集和等基因突变的组织切片和细胞系，提取样本的 DNA 和 RNA。采用数字 PCR 方法对样本对应的基因突变进行验证和定量，确定阳性参考品及其突变比例；然后将阳性参考品和野生型样本混合，稀释至突变率为 5% 和含 100 个融合 RNA 拷贝数的样本，经数字 PCR 定量后，作为检测限参考品。采用肿瘤基因突变检测试剂盒(二代测序法)进行准确性和检测限项目检测。

    数字 PCR 的结果表明成功制备了阳性参考品和检测限参考品，并确定其突变比例；制备的参考品能被肿瘤基因突变检测试剂盒(二代测序法)正确检出。

    建立了制备肿瘤基因突变参考品的方法，制备的参考品可以用于评价肿瘤基因突变检测试剂盒(二代测序法)的性能。

    靶向药物； 分子靶向治疗； 基因突变； 下一代测序； 标准物质研究

    肿瘤驱动基因3等是细胞分化、增殖、凋亡、迁移等过程中关键的基因，这些基因突变会持续激活相关信号通路，导致肿瘤的发生和发展[1-2]。随着这些基因被不断发现，针对特定分子靶点的药物研究进展迅速，包括表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)和棘皮动物微管相关样蛋白-4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因抑制剂(TKI)等[3]。检测这些相关基因是否发生突变或者融合，确定肿瘤患者的药物敏感性，可以为临床医生选择个体化靶向药物治疗提供参考。

    传统的肿瘤突变检测方法包括免疫组织化学、荧光原位杂交、荧光聚合酶链反应法和 sanger 测序法等[4-6]。这些肿瘤突变检测方法的局限性在于每次只能检测一种基因，而且根据检测基因数量的增多需要更多的活检组织。随着精准医疗和分子诊断技术的发展，下一代测序技术(next generation sequencing，NGS)在肿瘤基因检测方面得到广泛的应用，可以在同一份活检组织中一次检测多个基因突变，包括点突变、插入、缺失、DNA 拷贝数改变及重排(融合)等多种突变形式[7-9]。本研究拟探索建立一种制备肿瘤基因突变参考品的方法，制备的参考品能够用于评价基于二代测序技术平台的肿瘤基因突变检测试剂盒的性能 ......