李建宋，李亚，王继栋，郝之奎，薛长艳

    ·论著·

    高效抗肿瘤药物烟曲霉素的分离纯化及杂质分析

    李建宋，李亚，王继栋，郝之奎，薛长艳

    318000 浙江，台州职业技术学院应用生物技术研究所(李建宋、郝之奎、薛长艳)；318000 台州，浙江海正药业股份有限公司(李亚)；313000 浙江，湖州师范学院生命科学学院(王继栋)

    开发一种高纯度烟曲霉素的分离纯化工艺，并对烟曲霉素中的主要杂质进行分离纯化、结构鉴定。

    发酵液采用全料液萃取，以烟曲霉素收率为指标筛选最佳萃取溶剂，优化萃取条件，以甲醇和二氯甲烷混合溶液进行结晶，通过 HPLC 对烟曲霉素晶体中的主要杂质进行分离纯化，并采用核磁共振和质谱分析鉴定杂质结构。

    以甲基叔丁基醚为萃取溶剂得到的烟曲霉素收率最高，当甲基叔丁基醚:发酵液体积比为 2:1 时，萃取收率大于 85%，再经过两次结晶可以得到纯度 95% 以上的烟曲霉素晶体，分离并鉴定了烟曲霉素晶体中的两个主要杂质。

    通过对烟曲霉素提取工艺研究，确定了较优的工艺条件，该方法具有易操作、纯度高、收率高、成本低的特点，适合工业化生产，烟曲霉素中两个主要杂质是烟曲霉素类似物，通过杂质鉴定为烟曲霉素质量控制和安全性评价提供支持。

    烟曲霉素； 分离纯化； 杂质； 结构鉴定

    烟曲霉素(fumagillin)是从烟曲霉菌的发酵培养液中首次分离得到的具有多种生物活性的代谢产物[1-2]。最初用于治疗蜜蜂和鱼类的微孢子虫病，这也是当前治疗蜜蜂微孢子虫病的唯一有效药[3-4]。1990 年，Ingber等[5]发现烟曲霉素能抑制肿瘤血管再生，从而阻断肿瘤周围血液供给，达到治疗癌症的作用，其作用机制是在体内共价修饰甲硫氨酸氨肽酶-2(MetAP-2)活性位点中的 His-231，使酶失活，进而特异性地抑制血管内皮细胞的生长和增殖，且作用方式是不可逆的。近几年来研究发现，烟曲霉素及其半合成衍生物 TNP-470 和 CKD-732 能减少食物吸收、体重、脂肪量和脂肪细胞的大小，是治疗肥胖症的潜在药物[6]；烟曲霉素的半合成衍生物 TNP-470、PPI-2458 和 CKD-732 已用于治疗人类癌症的临床试验，通过以 MetAP-2 为作用靶标破坏肿瘤血管[7-8]。

    目前，关于烟曲霉菌产生次级代谢产物烟曲霉素及其衍生物的优化培养方法，仅有很少的报道，并且烟曲霉素效价低，很难用于工业化生产或应用[9-10]。国内外对产烟曲霉素菌株研究较多的为。2003 年，Yang 等[11]针对NRRL 2436 菌株 ......