杰永生，郑蕊，陈磊，靳少锋，孙磊，舒雄，綦惠

    关节软骨损伤是临床上十分常见的病症，也是骨科和运动医学中公认的治疗难题之一。据统计，年龄范围 15 ～ 24 岁的年轻人中有 4% ～ 10%，年龄超过 55 岁的老年人中有高达 80% 的人出现软骨病变[1-2]。由于关节软骨是一种无血管、无神经的结缔组织，细胞代谢缓慢，一旦缺损其自发修复和再生能力很差。目前临床治疗软骨损伤的常用方法如关节腔灌洗清创、微骨折术、自体/异体骨软骨移植，旨在减轻关节疼痛和缓解症状，并不能有效地促进软骨组织的修复再生；且这些方法存在很大的局限性，如供体部位损伤，效果不持久，排斥反应等[3-5]。因此，寻找新型的、可有效促进软骨生理性再生修复的方法具有极其重要的临床意义。

    近年来，组织工程学这一新型边缘交叉学科的出现为软骨缺损的修复提供了广阔的研究领域和应用前景。脂肪组织中分离出的脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells，ADSCs)表现出显著更高的增殖率，并且特异性呈三种谱系的分化：成脂肪、成骨和成软骨。与骨髓来源的间充质干细胞相比较，ADSCs 易于分离和大量获取，同时具有更好的分离重复性和更强的增殖能力，一直被认为是最适合临床应用的细胞[6-7]。此外，我们前期研究已成功构建脱细胞真皮基质/生物矿化胶原骨软骨一体化支架，具有良好的力学特征和生物相容性，有利于细胞的黏附与生长，易生物降解吸收[8]。本实验建立以 ADSCs 复合脱细胞真皮基质/生物矿化胶原骨软骨一体化支架修复新西兰兔的骨软骨缺损的动物模型，观察其在软骨缺损修复中的作用，为下一步临床提供相应的理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂和设备 人脂肪组织来源于北京知音创美医疗美容门诊部吸脂者，女性，抽吸部位为腹部，已获得提供者知情同意，术后无菌保存。甲醛、苏木精、伊红购自北京索莱宝生物科技有限公司；I 型胶原酶、胰酶、Trizol 试剂、高糖 DMEM、低糖 DMEM 和胎牛血清(FBS)购自美国 Gibco 公司；抗兔 CD90、CD105、CD44、CD14、CD45 和 CD19 抗体购自美国 BD 公司；CO2细胞培养箱购自美国 Shellab 公司；往复式真空泵购自上海 益化真空设备有限公司；倒置相差显微镜购自日本 Olympus 公司；冷冻大容量离心机购自湖南湘仪；FACSCanto II 流式细胞仪购自美国 BD 公司 ......