胡泽斌，高飞，曲守方，孙彬裕，杨振，孙晶，黄杰

    淋巴细胞是正常机体免疫功能最重要的一大细胞群，按其发生迁移、表面分子和功能的不同可分为 T 细胞、B 细胞和自然杀伤(NK)细胞。T 细胞亚群与细胞免疫功能有关，B 细胞与体液免疫功能有关，NK 细胞与非特异免疫功能有关。外周血 T、B 和 NK 淋巴细胞亚群检测已成为临床医学中最常用的检查项目之一。对于评价机体的免疫功能，诊断与监测肺部疾病、艾滋病、恶性肿瘤、器官移植等具有重要意义[1-3]。目前临床检测中常用流式细胞法(flow cytometry，FCM)对淋巴细胞亚群的表型和数量进行分析[1,4]。

    流式细胞法分析是一种在大分子水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析的检测手段，可以在短时内高速分析大量细胞或生物粒子的物理和化学特征参数。流式细胞分析主要靠流式细胞仪和各种特定发光物质标记的单克隆抗体试剂组合检测来实现[4]。

    目前 T/B/NK 淋巴细胞亚群检测试剂主要有两类：单一的单克隆抗体试剂和组合类的单克隆抗体试剂盒。近年来，涉及流式细胞分析对淋巴细胞亚群进行检测的企业越来越多，不同厂家的产品在抗体原材料克隆号和荧光素的选择、试剂组合方式，是否有匹配的溶血素、适用机型及配套自动分析软件或手动分析软件、产品绝对计数的方式(体积法/微球法)和成品质量控制等方面有所差异，导致检测结果的准确性也受到影响[5-8]。如何公正客 观地衡量同一项目不同厂家试剂的质量优劣？目前国内外尚无此类标准物质，临床操作或实验室质控通常使用进口的不同厂商的商品化质控血，不仅价格昂贵、购买费时费力、有效期较短，而且还缺乏标准化的赋值结果[9-12]。为解决这些问题，就需要研制基质效应小、均一性和稳定性良好的人淋巴细胞国家标准物质，不仅可填补国内市场的空白，降低使用成本，还可以提高检验结果的准确性和互认度，以及保障此类体外诊断试剂检验检测、审评和监管的需要。因此根据实际调研情况和探索实验结果，本科室开展了人淋巴细胞国家参考品的研制工作。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 仪器 冷冻离心机购自德国 Eppendorf 公司；倒置显微镜购自上海光学仪器六厂；生物安全柜购自江苏苏净集团有限公司；分装机购自保定兰格恒流泵有限公司；冻干机购自宁波新芝生物科技有限公司；电子天平购自福州华志科学仪器有限公司；移液器购自美国 Thermo 公司；涡旋仪购自上海医大仪器厂；FACS Calibur 和 Canto II 流式细胞仪由美国 BD 公司提供；ACEA Novocyte 流式细胞仪由艾森生物提供；Navios 流式细胞仪由北京旷博生物技术股份有限公司提供 ......