李萍，王静，沈美萍，戴成祥，李苏克，刘必佐

    干细胞是胚胎或成体个体中存在的可以持续自我更新，并具有多向分化能力的细胞，按照分化潜力的大小，干细胞分为全能干细胞、多能干细胞及单能干细胞。其中，间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)是一种多能干细胞，是来源于中胚层的体细胞，广泛存在于骨髓、脂肪、胎盘、新生儿脐带等组织中[1]。间充质干细胞在促进损伤组织修复，抗炎调节免疫等方面具有重要作用。其中脂肪间充质干细胞取材方便，不存在伦理问题，并且已经在治疗膝骨关节炎等疾病方面表现出良好的疗效[2]，呈现出巨大的医疗潜力而备受关注。

    目前，间充质干细胞促进组织修复和拮抗炎症的作用机制还不是十分明确，大量研究表明，除了依靠自我增殖和分化，间充质干细胞的大部分功能是通过分泌蛋白与外泌体等囊泡与其他细胞相互作用进行的[3-4]。外泌体是从细胞中释放出来的病毒大小的膜囊[5]。它是一种由活细胞通过内吞-融合-外排等一系列生物学机制产生，并通过主动分泌的方式排出细胞膜外的脂质双分子层膜囊，直径 < 150 nm[6]。它们含有介导细胞间通讯的蛋白质和核酸物质[7-9]，如脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、微小 RNA(miRNA)等。外泌体还包含主要组织相容性复合体(MHC)I 和 II[10]；四跨膜蛋白超家族，如 CD81、CD82、CD63、CD9[11-12]和肿瘤易感基因 101(TSG101)等[13]。

    目前富集外泌体的方法包括差速离心法、超滤法及沉淀法等，其中最常用的是差速离心法[14]。所谓差速离心法，就是通过逐步增加离心力(比较典型的就是离心力达到 100 000 × g，甚至更高)去除较小的不需要的细胞碎片和较大的囊泡亚群[15-16]。差速离心法的难点是浓缩和纯化所需的费用巨大和处理时间较长，特别是药物研发实验阶段需要浓缩大量的培养基来提取囊泡蛋白。超滤法是基于大小对溶液中的囊泡进行筛选，大量提取时对设备有较高要求。沉淀法是目前大多数外泌体分离试剂盒采用的方法，采用多种助沉降的试剂组分将蛋白因子和囊泡沉聚下来，再结合超滤或层析法筛选得到目标大小的囊泡[17]。然而试剂盒处理的样本体积有限，且沉淀溶液采用的试剂成分复杂，不适合囊泡 的后续医疗用途。所以我们希望探索一种通过单一成分将外泌体进行富集并纯化的方法，以满足生产需要。聚乙二醇(PEG)是由重复的乙二醇单元[-(CH2CH2O)n]组成的聚合物，是大部分沉淀法试剂盒采用的核心原料。PEG 也是药物传递系统的 首选聚合物，因其良好的可塑性和安全性而备受 推崇：它是任何配方开发过程中所选用辅料的首 选[18] ......