胡泽斌，高飞，孙彬裕，孙楠，杨振，黄杰

    ·技术与方法·

    人淋巴细胞国家参考品的协作标定

    胡泽斌*，高飞*，孙彬裕，孙楠，杨振，黄杰

    100050 北京，中国食品药品检定研究院体外诊断试剂检定所

    根据卫生行业标准 WS/T 360-2011《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》[1]以及业内共识，通常使用白细胞分化抗原 CD45/CD4/CD8/CD3/CD19/CD16 和(或)CD56 单一检测试剂或组合亚群检测试剂(流式细胞法)，通过流式细胞术检测外周血或骨髓细胞表面的白细胞分化抗原(CD)表达，来分析不同亚群淋巴细胞的绝对计数和百分比[2-4]。CD45+用于鉴别白细胞，在所有白细胞上都有表达，称为白细胞共同抗原，CD3+用于鉴别成熟 T 淋巴细胞，CD3+CD4+双阳用于鉴别 T 淋巴细胞中的辅助/诱导淋巴细胞亚群，CD3+CD8+双阳用于鉴别 T 淋巴细胞中的抑制/细胞毒性淋巴细胞亚群。CD3-CD19+用于鉴别 B 淋巴细胞，CD3-CD16+和(或)CD56+用于鉴别自然杀伤细胞(NK 细胞)。

    标准物质是具有准确量值的一种或多种足够均匀且稳定特性的材料，标准物质的定值是对标准物质特性量赋值的过程[5-7]。一般有以下四种定值方式可根据实际情况进行选择。①用高准确度的绝对测量方法定值，如参考测量程序和方法；②采用两种以上不同原理的已知准确度的可靠方法定值；③多个实验室合作定值，即协作标定；④使用已有的一级标准物质对正在研制的二级标准物质进行比较定值。本单位研制的人淋巴细胞国家参考品，预期用途是评价淋巴细胞亚群检测试剂的准确性。而目前尚无绝对测量方法对 CD45+/CD4+/CD8+/CD3+/CD19+/CD16+和(或)CD56+细胞亚群的绝对数量和百分比进行定值，故采用公认的流式细胞法，多家实验室协作标定的方式对其进行定值。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 仪器 BD FACS Calibur 流式细胞仪由巴德生物科技有限公司提供；FACS Calibur 和 Canto II 流式细胞仪由 BD 公司提供；Beckman Coulter 流式细胞仪、Navios 流式细胞仪、DxFLEX 流式细胞仪由贝克曼库尔特公司提供；ACEA Novocyte 流式细胞仪由艾森生物提供；Beckman Navios 流式细胞仪、BD Canto II 流式细胞仪由北京旷博生物技术股份有限公司提供；Bricyte E6 流式细胞仪由迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供 ......