白玉杰，霍桂桃，杨艳伟，孙立，苗玉发，周晓冰，李波

    急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)是一种临床常见的危重病症，轻者肾脏结构受损，重者肾脏功能紊乱，甚至导致患者死亡。据估计，药物性急性肾损伤占所有 AKI 病例的 25%，在老年患者中甚至高达 60%[1]。由于传统肾损伤标志物血清尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)，在肾功能显著丧失之前无法充分显示肾毒性，导致药物肾毒性在药物开发过程中经常被低估，因此，寻找新型的肾毒性生物标志物是预防药物性肾损伤的有效策略[2]。但由于不同毒性机制药物会影响肾脏的不同部位，而不同病因、不同损伤部位甚至不同病变时期，各生物标志物的表现又不完全相同，理想的肾毒性生物标志物要求既能快速灵敏地反映早期轻微肾损伤，又能识别肾损伤的具体部位(如肾小球或肾小管)[2-4]。因此，建立不同类型的 AKI 动物模型，对于筛选灵敏特异的肾毒性生物标志物具有重要意义。

    目前，新型肾毒性生物标志物的研究主要集中在 AKI 病人和啮齿类动物模型上[3-4]，而犬作为药物安全性评价常用的动物种属，尚缺乏新的肾毒性生物标志物的研究数据。因此为拓宽这些潜在的标志物在非啮齿类动物上的适用性，建立可靠的大型动物——犬的药物肾损伤模型，并以此开展犬肾毒性生物标志物的相关研究迫在眉睫。本研究选用肾小管损伤阳性药物顺铂建立 Beagle 犬急性肾损伤模型，确定不出现严重毒性反应同时又能造成适度肾脏损伤的适宜剂量及给药方案，同时开展新的生物标志物的初步研究，为探索灵敏、特异的 Beagle犬新型肾毒性生物标志物提供试验依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 试验动物与饲养条件 雄性 5～6月龄Beagle 犬，普通级，购自北京玛斯生物技术有限公司，合格证号 SCXK(京)2011-0003。Beagle 犬单笼饲养，笼具每日清洗，动物定量喂食，自由饮水，采尿期间禁食禁水；温度：15～25 ℃，日温差≤ 4 ℃，湿度：40%～70%，换气次数 8～10 次/h，每天光照时间 12 h。

    1.1.2 主要试剂和仪器 注射用顺铂冻干粉针剂(批号：4060221)购自齐鲁制药有限公司；犬Clusterin ELISA 试剂盒(批号：E15-066)购自捷克 Biovender 公司；白蛋白(Albumin)检测试剂盒(批号：607 850-01)购自美国 Roche 公司；CRE、BUN 生化检测试剂全部购自日本 Wako 公司；MINI AM4290 尿分析仪购自日本京都第一科学株式会社；7180 型全自动生化分析仪购自日本日立公司；全波长酶标仪 SpectraMax Plus 购自美国Molecular Devices 公司；Luminex 200TM液相芯片悬浮系统购自美国 Luminex 公司 ......