刘静，王佳，马金海

    免疫缺陷、着丝粒不稳定和面部异常( immunodeficiency,centromeric instability and facial anomalies，ICF)综合征是一种极其罕见的常染色体隐性遗传疾病[1]，截至 2019年全世界范围内仅有 70 多例报道[2]，因不易得到临床血样标本，极大限制了对该病的长期深入研究[3]。利用 EB 病毒转染技术，建立永生化淋巴细胞系，可以保存家系成员完整的基因组，为今后长期研究提供珍贵的材料[4]。本研究利用 EB 病毒转染 ICF 综合征家系外周血淋巴细胞，为原发性免疫缺陷病患者建立永生化细胞系提供可行性依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 细胞和耗材 胎牛血清购自美国 Hyclone公司；淋巴细胞分离液、青霉素/链霉素、环孢素 A(CyA)、丁酸钠和植物凝集素均购自美国 Sigma公司；RPMI1640 培养基购自美国 Gibco 公司；B95-8 细胞由卡罗林斯卡医学院惠赠。

    1.1.2 主要仪器 超净工作台购自苏州市洁净技术研究所；CO2恒温培养箱购自美国 Shellba 公司；-80 ℃ 超低温冰箱购自日本 Sanyo 公司；24、96 孔细胞培养板、25 cm2一次性培养瓶、冻存管均购自美国 Costar 公司；离心机购自上海安亭科学仪器厂；FACSAria II 流式细胞分选仪购自美国BD 公司。

    1.1.3 样本 2 岁女孩，因反复感染 1年余就诊，体格检查发现患儿面部发育异常(低耳位、眼距宽)，辅助检查免疫球蛋白 IgG、IgM、IgA 均低于正常，T 细胞数量正常，基因检测 CDCA7 基因复合杂合突变(c.974_975del p.Thr325Arg fs ter 17)，确诊为免疫缺陷、着丝粒不稳定和面部异常综合征。患儿为家系中先证者，其父母及姐姐无临床症状。

    1.2 方法

    1.2.1 EB 病毒悬液的制备 将 B95-8 冻存细胞复苏后重悬于 5 ml 完全培养液中(RPMIl640 中添加 20% 胎牛血清、链霉素/青霉素) ......