临床用途细胞冻存保护液探索实验
保护剂,干细胞,注射液,1材料与方法,2方法,2结果,1PBMC组不同配方冻存保护液活细胞复苏率,2UC-MSC组不同配方冻存保护液活细胞复苏率,3不分组不同配方冻存保护液活细胞复苏率,3讨论
姬广超,王晓明,王玉琪,宋航飞近些年,我们国家的细胞产业发展迅速。不论是干细胞技术还是免疫细胞技术,相关的科学研究都十分火热,且有一部分机构的相关产品已经进入了临床试验阶段。不同于其他药品,细胞产品是具有代谢能力的活细胞,保存方法和保存时间受到了很大的限制,影响了其应用。
新鲜细胞产品保存时限较短,为了长期保存细胞产品,通常进行细胞冻存,保存在-80 ℃ 冰箱或是-196 ℃ 的液氮环境下。细胞冻存过程对细胞有伤害,所以需要细胞冻存保护液来减低细胞的损伤。实验室常用的细胞冻存保护液配方是 10% 二甲基亚砜(DMSO)+ 90% 胎牛血清(FBS),通用性好,细胞保护效果好,受到了广泛认可。但其配方中含有动物来源的 FBS,有无法消除的安全隐患。所以,用可临床应用的成分替代 FBS 具有重要意义。本实验采用可临床应用的成分替代 FBS,探索一种可供临床应用的细胞冻存保护液。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样本 细胞样本由上海安库生医生物科技有限公司细胞库提供。
1.1.2 仪器 HFsafe-1200LC 生物安全柜/HF90 二氧化碳培养箱为力康生物医疗科技控股有限公司产品;L535-1 低速离心机为湖南湘仪实验室仪器开发有限公司产品;Countstar IC-1000 细胞计数仪为上海睿钰生物科技有限公司产品。
1.1.3 主要试剂 6% 羟乙基淀粉 130/0.4 氯化钠注射液购自费森尤斯;二甲基亚砜购自美国 Sigma 公司;人血白蛋白购自上海莱士血液制品股份有限公司;胎牛血清购自达科为生物技术股份有限公司;0.9% 氯化钠注射液购自安徽双鹤药业;葡萄糖购自碧云天生物;右旋糖酐购自上海泰坦科技股份有限公司;MSC FreezIS DMSO-Free 购自 Irvine Scientific 公司 ......
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