章毅，陈侃俊，伍婷，李品宙，胡肖希，孔凡瑞，祁成，陈亮

    ·论著·

    不同存储温度的huMSC-exo对UVB辐照HaCaT细胞的修复作用研究

    章毅*，陈侃俊*，伍婷，李品宙，胡肖希，孔凡瑞，祁成，陈亮

    200051 上海，中国干细胞集团有限公司/中国干细胞集团上海生物科技有限公司/中国干细胞集团海南博鳌附属干细胞医院有限公司/上海市脐带血造血干细胞库/上海市干细胞技术有限公司

    探究了不同存储温度的 huMSC-exo 对 UVB 辐照 HaCaT 细胞的修复作用，为外泌体存储选择适宜的温度条件提供理论依据。采用超速离心法从 huMSC 培养基上清中提取外泌体，用 Western blot、纳米颗粒跟踪分析技术和透射电镜技术进行表征，并置于–80、–20、4、25 和 45 ℃存储 1、3、7、14、30、50、100 和 150 d。构建 UVB 辐照 HaCaT光老化细胞模型，用 huMSC-exo 处理 24 h 后观察细胞形态、检测细胞存活率、SA-β-gal 活性、T-SOD 活性、MDA 和 LDH 含量。huMSC-exo 呈具有清晰膜的茶托样结构，尺寸中位数为 114 nm，30 ～ 150 nm 囊泡数量占比约61.42%，表达外泌体表面标记蛋白 CD9、CD63 和 CD81。–80 ℃和25 ℃存储 1 ～ 150 d 的 huMSC-exo 能显著提高 UVB 辐照 HaCaT 细胞存活率、恢复细胞形态、降低 SA-β-gal 活性、部分恢复细胞 T-SOD、MDA 和 LDH 水平；–20 ℃存储的 huMSC-exo 对 HaCaT 的增殖活性、细胞形态和SA-β-gal 活性有恢复作用；4 ℃存储的 huMSC-exo 能减轻细胞老化水平；45 ℃存储的 huMSC-exo 无显著修复作用。–80 ℃、25 ℃存储的 huMSC-exo 能够显著恢复 UVB 辐照引起的 HaCaT 损伤，–20 ℃、4 ℃ huMSC-exo 作用效果次之，45 ℃的 huMSC-exo 无显著影响，提示–80 ℃和 25 ℃能够较好地维持huMSC-exo 的生物学功能。

    外泌体； 间充质干细胞； HaCaT 细胞； UVB 辐照

    皮肤老化可以分为内在老化和外在老化两种类型，后者又称光老化。阳光照射，尤其是暴露于紫外线 B(ultraviolet B，UVB)是导致皮肤光老化的主要因素，其还会引起机体活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)积聚、TNF-α、IL-1α、IL-16、IL-10 和 IL-8 等炎症因子激活及皮肤慢性炎症[1] ......