孙静静，王格，赵巧辉，李桂林

    ·综述·

    哺乳动物细胞CHO制备重组抗体关键技术研究进展

    孙静静，王格，赵巧辉，李桂林

    450016 郑州伊美诺生物技术有限公司

    哺乳动物细胞能够提供复杂的翻译后修饰，表达蛋白性质与天然蛋白接近，使蛋白药物更加稳定有效。自 1987 年 FDA 批准第一个中国新药组织型纤溶酶原激活剂(TPA)，哺乳动物细胞广泛应用于重组蛋白的生产，开始了工业化生产之路。在生物制药行业几十年的快速发展中，哺乳动物 CHO 细胞成功生产了众多细胞因子、重组酶、重组抗体、重组融合蛋白等有价值的生物技术药物，为市场需求作出重大贡献，同时也奠定了它在生产细胞中的优势地位。抗体药物是现代生物医药产业的主力军，占全球生物药物市场的 50% 以上，是生物医药产业增长最快的细分领域，抗体药越来越多地应用于几乎所有的医学分支，抗体疗法的日益成功推动了重组抗体技术和生产设施的设计和管理。抗体药物自身有着不容忽视的问题，如结构复杂不稳定、大规模生产复制困难、研发周期长、生产成本高、工艺复杂等[1]。随着国内抗体药物的发展和应用，降低成本成为企业的主要任务，提高蛋白表达量是降低成本的主要手段之一。提高外源蛋白表达水平的方法很多：包括目的基因序列优化、分泌信号肽筛选、工艺流程相关参数优化、培养基优化及细胞株优化等。本文重点对哺乳动物细胞 CHO 重组抗体制备上游关键技术因素包含宿主细胞、载体、培养基、培养设备等进行综述，以期提供提升抗体表达量，降低成本的解决方案。

    1 载体

    CHO 细胞表达载体基本元件包括复制起点、启动子、poly A 加尾信号、筛选标记、多克隆位点等。启动子一般较多采用 SV40 和 CMV 两种，CMV 启动子通常位于目的基因之前，SV40 启动子位于筛选标记之前。目的基因在 CHO 细胞中的表达受基因拷贝数、转录水平、翻译水平及翻译后修饰的效率、目的基因整合的染色体区域状态和整合于宿主染色体的位置等诸多因素的影响，载体设计与优化对于提高目的蛋白的表达量十分重要[2]。

    1.1 常用载体

    1.1.1 单顺反子 早期进行稳定表达重组抗体构建时，将抗体的重链序列(HC)和轻链序列(LC)分别构建至两个单顺反子载体中，这种构建方法缺点较多：①耗时且较难表达；②筛选稳定株时需要 2 个不同的筛选标记；③整合进入宿主 DNA 的效率较低，影响表达。早期瞬时表达时常用单顺反子构建，便于快速表达，但表达量相对较低。由于轻链分子量较重链低，轻链表现出更高的转录和翻译效率 ......