李红然

    ·新型冠状病毒专栏·

    新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评关注点

    李红然

    100081 北京，国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心，Email：lihr@cmde.org.cn

    新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎，COVID-19)为新发急性呼吸道传染病，目前已成为全球性的公共卫生事件[1]。新冠肺炎疑似病例的确诊需要具备病原学或血清学证据[2]，目前国内广泛应用的新型冠状病毒(新冠病毒)病原学检测为实时荧光 PCR 核酸检测，其具有快速、灵敏、特异等特点。病毒基因组测序亦属于核酸检测范畴，一般用于对结果进行确认以及病毒变异监测[3]。本文所指新冠病毒核酸检测试剂是指基于逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法，扩增新冠病毒特异性基因，并通过荧光标记的探针，对反应过程中的 PCR 产物进行实时检测的试剂。

    2020 年 1 月底，我国率先批准全球首个新冠病毒核酸检测试剂，截至目前，国家药监局批准的新冠病毒核酸检测试剂已近 30 个。医疗器械技术审评中心(CMDE)于 2020 年 2 月 12 日在官网公布了《2019 新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点》(以下简称“要点”)[4]，对相关产品的研发和申报具有重要的指导作用。目前，有多家企业正在开发或申报新冠病毒核酸检测试剂，部分企业由于对新发传染性病毒的研发经验不足，对“要点”的理解不充分，导致在注册申报过程中面临较大困难。本文根据“要点”的内容，结合多个相关产品的审评经验，总结注册资料中出现问题较多的关键点，对新冠病毒核酸检测试剂注册的部分内容进行阐述，旨在为相关试剂的研发和注册申报提供建议和参考，提升产品研发速度，提高申报资料的质量。

    1 主要原材料

    新冠病毒核酸检测试剂的主要原材料包括引物和探针，脱氧三磷酸核苷(dNTP)，酶(DNA 聚合酶、逆转录酶、尿嘧啶 DNA 糖基化酶)，阴性和阳性质控品，内标(内对照)。下面对注册申报中问题较多的原材料进行描述。

    1.1 引物和探针

    引物和探针是决定试剂能否准确且特异检出新冠病毒的重要原材料。申请人应针对所选择的靶基因，合理设计引物和探针，详述设计原则。一般需设计多对引物和探针以供筛选，通过序列比对和功能性试验的方式，对病毒进行包容性和特异性(如交叉反应)的评价，其中序列比对包括与已公布新冠病毒序列的比对，及与易产生交叉反应的其他病原体的序列比对；功能性试验包括对不同来源、不同滴度的新冠病毒核酸阳性样本，和不同的近缘病原体的检测 ......