樊帅，吕广新，刘凡，金媛媛，杨兆勇

    作者单位：100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程研究室

    糖苷是一类具有生物活性的天然产物[1]。与常见的O-糖苷相比，C-糖苷是自然界中极其少见的一类。不同于O-糖苷键在体内易被水解，C-糖苷键稳定性高，一些天然药物C-糖基化修饰后提高了生物利用度和改善了药理活性[2]。这些C-糖苷广泛分布于植物中，具有抗炎[3]、抗肿瘤[4]、降血糖[5-6]和保健[7]等功效。在C-糖苷的生物合成途径中，C-糖基转移酶可催化C-糖苷类化合物的 C-C键的形成，进而合成具有重要生物学功能的各类次级代谢产物。另外通过酶催化制备C-糖苷类化合物不仅能够克服化学合成环境污染、产率低和苛刻反应条件等不利因素，还具有催化立体选择性和区域选择性等特点。

    现阶段，C-糖基转移酶主要来源于微生物和植物，其中微生物来源的 C-糖基转移酶主要为来源于Escherichia coliCFT073 的 IroB[8]、来源于Streptomyces griseoflavus的 gilGT[9]和来源于Streptomyces fradiae的 UrdGT2[10]。已知植物来源的C-糖基转移酶存在于Oryza sativa[11]、Zea mays[12]、Fagopyrum esculentum[13]、Glycine max[14]、Gentianatrifloral[15]。糖基转移酶的三维结构分为GT-A 和 GT-B 两种类型，目前大部分糖基转移酶的结构生物学研究主要集中在O-糖基转移酶，对于C-糖基转移酶，尤其植物来源的C-糖基转移酶报道较少，目前仅有来源于Glycyrrhiza glabra的GgCGT[16]和Fagopyrum esculentum的 UGT708C1[17]等少数几个C-糖基转移酶有结构报道。

    来源于Mangifera indicaL.的C-glycosyltransferase MiCGTb(EC：2.4.1.-)[18]能够位置选择性地将酰基间苯三酚 2-O-糖苷转化为3-C-糖苷[18-19]，还能催化 di-C-糖基化反应[20]。其催化机制的解析需要 MiCGTb 的空间结构作为基础，因此，本研究主要对 MiCGTb 的空间结构进行研究，构建 MiCGTb 截短蛋白 MiCGTb1(Asn8-Lys465)原核表达载体，利用大肠杆菌表达系统进行 MiCGTb1 蛋白的异源表达，经 Co2+亲和层析、离子交换层析和分子排阻色谱纯化后 ......