刘淑洁，闻镍，王宇，黄舒佳，淡墨，汤瑶，王晓霞，陶琳，耿兴超，王三龙，刘丽

    作者单位：100176 北京，中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室(刘淑洁、闻镍、王宇、黄舒佳、淡墨、汤瑶、王晓霞、耿兴超、王三龙、刘丽)；100022北京，国家药品监督管理局药品审评中心(刘淑洁)；330096 南昌，南昌弘益药业有限公司(陶琳)

    LMV-12(HE003)(以下简称 LMV-12)为小分子酪氨酸激酶抑制剂，靶向抑制 c-Met、VEGFR2及 RET 等信号通路而发挥抗肿瘤作用，杀死肿瘤细胞，减少转移并抑制血管生成。本品是我国自主研发的创新型小分子抗肿瘤药物，前期研究发现该化合物对人肺癌细胞和人胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤均有明显的生长抑制作用，但该化合物在动物体内的安全性尚待研究。同时前期药代研究发现该化合物的代谢产物 M4 在体内暴露量较高，且与其抑制肿瘤的作用机制密切相关，故该代谢产物的安全性和体内暴露也值得关注[1-3]。在非临床安全性研究中开展伴随的毒代动力学研究能够评价药物暴露与毒性反应的关系，可靠的生物分析方法是开展毒代动力学研究的前提和基础[1-3]。LMV-12 及其代谢产物在大鼠体内血药浓度测定的生物分析方法及方法学验证尚未开展，亟需建立有效可靠的分析方法、开展验证以支持相关临床前和临床研究。

    本研究优化样品前处理和检测条件，采用HPLC-MS/MS 方法，建立了同时实现 SD 大鼠血浆内 LMV-12 及代谢产物 M4 的定量研究方法，并开展了完整的方法学验证，证明该方法的选择性、残留、标准曲线、定量下限、准确度与精密度、基质效应、稀释可靠性等符合要求，并对生物基质中的待测物稳定性进行了考察。为 LMV-12 的药代动力学和毒代动力学研究提供了可靠的生物分析方法。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 受试物和内标 LMV-12(HE003)，白色粉末，无臭，纯度 99.6%；M4，类白色粉末，纯度98.2%；CH3-LMV-12，白色粉末，纯度 99.2%，均由南昌弘益药业有限公司提供。

    1.1.2 试剂 乙腈(HPLC 纯)、甲醇(HPLC 纯)、甲酸(LC/MS 纯)均为美国 Fisher scientific 公司产品；甲酸铵(质谱纯)，Fluka；DMSO(GC 纯)购自美国 Sigma 公司；超纯水由 Millipore Milli-Q Advantage A10 超纯水机当日制备。 ......