张可华，贾春翠，吴雪伶，纳涛，韩晓燕，吴婷婷，孟淑芳

    ·论著·

    培养基中细胞生长因子增强人间充质干细胞成瘤性风险

    张可华，贾春翠，吴雪伶，纳涛，韩晓燕，吴婷婷，孟淑芳

    100050 中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心

    本中心在人间充质干细胞(hMSCs)第三方复核检验中发现某些无血清培养基会促使 hMSCs 在软琼脂克隆试验中呈现阳性结果。为进一步明确该现象，探索促使 hMSCs 软琼脂克隆阳性的培养基成分并深入分析其风险。比较几种不同品牌的商品化无血清培养基对 hMSCs 软琼脂克隆形成的影响，通过细胞因子抗体芯片和 ELISA 定量检测筛选并初步确定促使软琼脂克隆形成的培养基成分，通过在培养基中添加特定成分进一步明确该成分对 hMSCs 成瘤性的影响，并通过长期添加试验和细胞转录组测序分析该培养基成分持续作用对 hMSCs 生长和基因转录方面的影响。研究结果显示，部分品牌无血清培养基可促使 hMSCs 在软琼脂克隆形成试验中呈现阳性。培养基成分分析显示这些培养基中表皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血小板源性生长因子(PDGF-BB)呈现出较高水平。在含 10% FBS 的完全培养基中分别或组合添加EGF(50 ng/ml)、bFGF(50 ng/ml)和 PDGF-BB(10 ng/ml)，均可促使 hMSCs 软琼脂克隆形成。以上述浓度添加生长因子持续培养 hMSCs 10 代后，再撤掉生长因子继续培养 3 代，细胞增殖和基因转录发生显著改变。培养基中含有的高浓度 EGF、bFGF 和 PDGD-BB 等生长因子成分能够增强 hMSCs 成瘤性风险，用这些生长因子长期培养 hMSCs 可对细胞增殖和基因转录造成显著影响。本研究提示在 hMSCs 类细胞治疗产品工艺研发中，需高度关注培养基关键成分对 hMSCs 特性的影响，结合成瘤性分析优化并筛选最适培养基。

    间充质干细胞； 成瘤性； 表皮细胞生长因子； 成纤维细胞生长因子； 血小板源性生长因子； 软琼脂克隆形成试验

    人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells，hMSCs)是一类具有一定程度的自我复制更新、多谱系分化能力的成体干细胞，广泛存在于人体各组织中，具有独特的免疫调控和促进组织再生功能[1-3]。由于 hMSCs 来源相对容易和制备方法相对简单，具有十分广泛的临床适应证，已成为目前干细胞治疗研究领域中发展最为迅速的一类[4-7]。截至 2021 年第一季度 ......