邓春平，梅雄，王星，刘翠华

    ·论著·

    重组抗VEGF单抗工艺特异性宿主细胞蛋白质残留ELISA检测方法的建立与验证

    邓春平，梅雄，王星，刘翠华

    519085 广州，百奥泰生物制药股份有限公司(邓春平、梅雄、刘翠华)；63110 St. Louis，ArrayBridge Inc.(王星)

    建立重组抗 VEGF 单抗中 CHO 宿主细胞蛋白质(HCPs)残留的 ELISA 检测方法，并对方法进行验证。采用空载 CHO 细胞制备工艺特异 HCPs，并进行二维电泳表征；采用二维电泳-Western blot(2D SDS-PAGE/Western blot)法对 6 种抗 CHO HCPs 多克隆抗体(C3、C6、C7、AB000103-A、AB000103-C、3G-0016-AF)识别重组抗 VEGF 单抗工艺特异性 HCPs 的覆盖率进行测定；选择覆盖率最高的多抗作为检测抗体，建立制品工艺特异性 HCPs ELISA检测方法，并对方法的线性、基质干扰、稀释线性、灵敏度、精密度和准确性进行验证；此外对该方法与商业化通用检测方法进行了桥接对比研究。制备的工艺特异性 HCPs 蛋白质谱分布广泛；筛选得到覆盖率为 59% 的 C6 兔抗 CHO HCPs 多抗作为检测抗体，并建立了夹心 ELISA 检测法；该方法不受原液基质干扰，HCPs 标准品在 3.33 ～ 810 ng/ml 浓度范围曲线拟合良好，原液在 1 ～ 8 倍范围内有良好的稀释线性；检测限 0.075 ng/ml，定量限 20 ng/ml；试验内和试验间变异系数均不超过 10%；30、150 及 300 ng/ml 浓度的 HCPs 标准品的回收率分别为 107%、107% 和 95%；工艺特异性 ELISA法测得的结果显著高于商业化通用检测方法。建立了重组抗 VEGF 单抗工艺特异性 HCPs ELISA 检测方法，该方法具有良好的检出率、灵敏度、精密度、准确性和线性，适用于该制品 HCPs 残留检测。

    重组抗 VEGF 单抗； CHO 细胞； 宿主细胞蛋白质； 酶联免疫吸附法

    宿主细胞蛋白质(host cell proteins，HCPs)是由宿主细胞产生或编码的与预期目标药物无关的蛋白质，其组成复杂，主要与宿主表达系统和活性成分的表达方式有关[1]。由于 HCPs 来源于非人表达系统，其外来或“非自身”的特性决定几乎任何单个 HCP 都有可能在人体内引发免疫反应[2]。HCPs 在人体内的不良反应包括：诱导机体产生抗 HCPs 抗体 ......