叶倩，汪祺，文海若

    亚硝胺类化合物由亚硝酸盐或氮氧化物等与胺类物质反应后生成，该反应可存在于药品生产中的各个环节，来自原料药的生产试剂、降解产物、包装材料等。近年来，多种药品中可发现 N-亚硝基二甲胺(N-nitrosodimethylamine，NDMA)[1]，作为药品杂质其遗传毒性风险以及监管限度的确定受到广泛关注。除 NDMA 外，亚硝胺类化合物包括 N-亚硝基二乙胺(N-ethyl-N-nitrosoethanamine，NDEA)、N-亚硝基二丁胺(N-nitrosodibutylamine，NDBA)、N-亚硝基二异丙胺(N-nitrosodiisopropylamine，NDIPA)、N-亚硝基乙基异丙基胺(N-nitrosoethyl isopropyl amine，NEIPA)等 120 余种。国际癌症研究机构(international agency for research on cancer，IARC)将亚硝胺类化合物列为 2A 类致癌物，已有动物致癌数据，且机制研究提示其存在致癌风险[2]。在监管方面，参考人用药品注册技术要求国际协调会发布的 ICH M7(2017年)，亚硝胺类化合物属于较高致癌风险的“关注队列”(cohort of concern，COC)[3]。NDMA 和 NMBA 根据其大鼠的 50%致癌剂量(median toxic dose，TD50)值折算，成人每日最大摄入量不超过 96 ng；NDEA、NDBA、NDIPA 和 NEIPA 则为 26.5 ng[4]。

    然而，并非所有亚硝胺类化合物均存在致突变性[5]。随着对药品中亚硝胺类杂质控制的重视，明确某个亚硝胺类化合物是否具有致突变性是界定其监管限度的关键。细菌回复突变试验(又称 Ames试验)是最常用的评价化合物是否具有基因突变风险的方法[6]。亚硝胺类化合物的致突变性主要与其代谢产物有关，其中 CYP2E1 为主要代谢酶[7-8]。大鼠肝微粒体 S9是最常用的 Ames 试验的代谢活化系统，但鉴于不同种属的 S9中所表达的酶含量有所不同，其对 N-亚硝胺类化合物的代谢能力有待考察。此外，常规的 Ames 试验多采用平皿掺入法，为保证 S9与亚硝胺类化合物充分作用，文献建议亚硝胺化合物的 Ames 试验使用预培养法开展[9]。然而上述研究数据较为陈旧，对当前的试验指导不佳。本研究以 NDMA 和 NDEA 为例，比较不同种属来源 S9以不同培养方法对 Ames试验结果的影响，为致突变活性与代谢活化有关的物质的 Ames 试验条件确立提供重要参考 ......