王芊，张博文，罗鹏，郭建勋，王宏刚，聂井君，王任先，陈大福

    ·论著·

    骨肉瘤干细胞差异表达microRNA对其干性特性的影响

    王芊，张博文，罗鹏，郭建勋，王宏刚，聂井君，王任先，陈大福

    探讨骨肉瘤干细胞差异表达 microRNA(miRNA)及其对骨肉瘤干细胞的干性特性(自我更新、侵袭、凋亡)的影响。采用无血清悬浮培养法和流式分选术分离鉴定骨肉瘤干细胞；分别采用成球实验、体外侵袭鉴定骨肉瘤干细胞的干性特性；高通量测序检测骨肉瘤干细胞中差异表达 miRNA；采用定量逆转录 PCR(qRT-PCR)技术检测相关差异表达 miRNA 的情况，验证 miRNA 结果；相关 miRNA 抑制剂干扰后，分别进行成球实验和侵袭实验检测 miRNA 对骨肉瘤干细胞自我更新、侵袭能力和细胞凋亡的影响。成功分离 Saos-2 的 CD133+和 CD133-细胞，具有较强的自我更新能力和侵袭能力。与 CD133-细胞相比，CD133+细胞的高表达 miRNAs 共有 15 个；低表达 miRNAs 共有 2 个。采用 qPCR 技术验证高通量测序差异表达 miRNA 相关结果，CD133+亚群中 miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091 表达上调，miR-3143、miR-3150a-5p表达下调。抑制相关高表达 miRNA(miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091)表达后，CD133+细胞的自我更新能力和侵袭均下降，细胞凋亡上升。骨肉瘤干细胞中具有多种差异表达 miRNA，其对骨肉瘤干细胞的干性特性具有调控作用。

    骨肉瘤干细胞； CD133； 自我更新； 侵袭

    骨肉瘤是骨科常见的恶性肿瘤，好发于青少年，骨肉瘤具有明显的转移特性。一旦发生转移，则预后很差，其 5 年平均的生存率为 20% ～ 30%[1-2]。目前对于影响骨肉瘤侵袭和转移的分子机制尚不明确。因此，降低骨肉瘤复发转移的发生，探究复发转移发生发展的机制非常重要。

    骨肉瘤干细胞(osteosarcoma stem cells，OSCs)是指骨肉瘤中存在一少部分具有干细胞性质的细胞群。2005 年，Gibbs 等[3]首次报道了一小部分具有自我更新能力，并能在无血清悬浮培养条件下形成肿瘤细胞球的细胞，这部分细胞高表达 STAT3 和多潜能干细胞标记 Oct3/4、Nanog，显示出干细胞样的特性[4-6]。国内外研究者通过侧群细胞法、无血清悬浮培养、表面标志物分选等多种途径成功分离了 OSCs ......