李江姣，刘茹凤，李康，黄洋，徐潇，石继春，王春娥，梁丽，陈驰，叶强

    ·技术与方法·

    脑膜炎奈瑟菌核酸检测试剂国家参考品的研制

    李江姣*，刘茹凤*，李康，黄洋，徐潇，石继春，王春娥，梁丽，陈驰，叶强

    脑膜炎奈瑟菌(，Nm)，又名脑膜炎双球菌或脑脊髓膜炎双球菌，是一种革兰氏阴性菌，根据荚膜多糖可分为 A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K 等 13 个血清群，主要寄居在人体鼻咽部，可通过飞沫传播。人感染脑膜炎奈瑟菌可引起败血症或流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)等急性呼吸道传染病，常伴随着较高的死亡率[1-3]。建立高效的 Nm 检测方法对流脑的临床诊断有重要的意义。

    流脑的常规诊断方法是从脑脊液和血液中分离出病原菌，而传统的细菌培养法检测时间较长，Nm 易在标本运输过程中死亡，当患者接受抗菌药物治疗以及受其他非特异性因素的影响时，会引起细菌分离的失败，降低细菌培养法的准确性，因此采用敏感性更高的检测方法变得十分重要。近年来，核酸检测技术因其快速、灵敏等特点被广泛应用于临床检测。利用核酸检测技术检测 Nm 的敏感性和特异性高，经济成本低，为 Nm 的检测提供了重要的技术手段[4-6]。因各种检测试剂的取样量及选取的目的基因片段不同，其检测结果的准确性及灵敏度等存在差异。由于缺乏标准统一的国家参考品，使得该类检测试剂的质量控制和评价成为难题。本研究拟研制一套脑膜炎奈瑟菌国家参考品，提升对脑膜炎奈瑟菌核酸检测试剂的质量控制和评价水平。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂及仪器 GC 基础培养基、血红蛋白粉均购自美国 BD 公司；中国细菌浊度国家标准品来源于中国食品药品检定研究院；脑膜炎奈瑟菌核酸检测试剂盒 A(批号：20200501)、试剂盒 B(批号：P20200701)和试剂盒 C(批号：20200601)分别来自 3 家脑膜炎奈瑟菌核酸检测试剂生产企业；培养箱 5810E 购自美国 Nuaire 公司；ABI 7500 实时荧光定量 PCR 仪购自美国 ABI 公司。

    1.1.2 菌株 10 株阳性参考品菌株脑膜炎奈瑟菌均来源于中国医学细菌保藏管理中心，编号分别为：CMCC(B)29015、CMCC(B)29016、CMCC(B)29031、CMCC(B)29050、CMCC(B)29051、CMCC(B)29052、CMCC(B)29055、CMCC(B)29043、CMCC(B)29046、CMCC(B)29028；10 株阴性参考品菌株也来源于中国医学细菌保藏管理中心 ......