姜华，黄瑛，李路路，王晓姝，兰洁，侯田田，耿兴超，刘丽，文海若

    ·论著·

    免疫缺陷小鼠体内人源T淋巴细胞亚群流式检测方法研究

    姜华*，黄瑛*，李路路，王晓姝，兰洁，侯田田，耿兴超，刘丽，文海若

    100176 北京，中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室

    比较流式细胞术(FCM)与活体成像法、qPCR 法识别外周血 CAR+细胞的结果，验证其结果的可靠性和灵敏性。分别给予免疫缺陷型荷瘤(Raji-Luc 细胞造模)小鼠溶媒、CAR-T1 或CAR-T2 细胞。在不同时间点测定动物体内 Raji-Luc 细胞的荧光强度，FCM 法测定人源 T 淋巴细胞和 CAR-T 细胞中的 CD3+CD4+和 CD3+CD8+个数，并使用 qPCR 法检测外周血中每纳克基因组 DNA 中 CAR-T1 和 CAR-T2 拷贝数。CAR-T1 组动物体内 T 细胞及 CAR-T 细胞数量在给予细胞后第 5 ～ 7 周大幅增加。CAR-T2 组动物体内 T 细胞及 CAR-T 细胞数量在给予细胞后第 10 ～ 14 天大幅增加，之后大幅降低，给予细胞后第 4 周降至基线且未见再次扩增。CAR-T 细胞的流式检测结果与活体成像结果基本相符，且与 qPCR 法检测外周血中 CAR-T 细胞的分布趋势基本一致。此外，EDTA-K2抗凝剂对 FITC 标记的抗 CD8+抗体有较明显的影响，导致标记为 CD3+CD8+的细胞群左移且检测结果为零。对不同增殖特性的 CAR-T 细胞，流式检测结果与其体内肿瘤杀伤情况相关，且比 qPCR 法更为准确和灵敏，为 CAR-T 细胞的非临床安全性评价试验设计提供有益借鉴。

    嵌合抗原受体 T 细胞免疫疗法； 生物分布； 流式细胞术； 抗凝剂

    嵌合抗原受体 T 细胞(chimeric antigen receptor T cell，CAR-T cells)免疫疗法是继放疗、化疗、抗体和疫苗后最具前景的肿瘤免疫疗法，已在急性 B 系淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上取得了显著疗效[1-2]。该疗法通过对患者或捐献者外周血中 T 细胞进行基因修饰等改造，使 T 细胞与肿瘤细胞表面的特异性抗原结合并激活，通过释放穿孔素、克林霉素 B等直接杀伤肿瘤细胞[3-4]。CAR-T 的临床前安全性研究通常使用荷瘤免疫缺陷小鼠开展，以模拟 CAR-T 在肿瘤患者中的靶向识别、扩增及迁移过程。细胞治疗产品的生物分布(即药代动力学研究)有助于了解其在体内的增殖和分布情况 ......