彭海航，靳春鹏

    ·综述·

    CRISPR/Cas9技术在乙肝治疗中的研究与进展

    彭海航*，靳春鹏*

    100160 北京，国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心

    慢性乙型肝炎(CHB)是由乙型肝炎病毒(HBV)持续感染引起的肝脏慢性炎症性疾病。CHB 包括乙型肝炎病毒 e 抗原(HBeAg)阳性的 CHB 患者及 HBeAg 阴性的 CHB 患者。流行病学调查结果显示，我国原发性肝癌(PLC)患者乙肝表面抗原 HBsAg 阳性率高达 90%，而 PLC 主要在肝硬化基础上发生，提示HBV 长期持续感染最终可导致肝硬化及 PLC[1]。

    病毒性肝炎每年导致多达 134 万人死亡，并且仍然是肝硬化和肝细胞癌发病率和死亡率的主要原因[2]。乙型肝炎病毒(HBV)感染对全球健康问题的影响很大，估计有 2.57 亿人长期感染，特别是中国，拥有约 1.2 亿乙肝病毒携带者。虽然在疫苗和抗病毒药物开发方面取得了有价值的进展，全球预防性疫苗接种计划降低了 5 岁以下儿童的 HBV 流行率，但在非流行的非洲国家覆盖率不足，意味着一些国家的患病率仍然很高[2]。

    目前，批准的治疗剂包括干扰素α、聚乙二醇化干扰素 α、拉米夫定、替比夫定、腺病毒二倍体、恩替卡韦、替诺福韦地索普西富马酸盐和替诺福韦艾拉酚胺。这些治疗剂有时会因施用周期长，患者选择的种类以及是否有利于同时或顺序给药的观点相互矛盾而有所不同[3]。但是仍然没有可靠的治疗 HBV 感染的方法。而且治疗的关键限制是它们无法可靠地实现精准的病毒学治疗[4]。

    随着基因打靶技术的出现，使得精准的病毒学治疗成为了可能。经典的基因打靶技术是基于 DNA 同源重组原理，用设计的同源基因片段替代靶基因片段，但是这种打靶技术在体细胞中的成功率极低。之后发展出的 ZFN(zinc finger nucleases)、TALEN(transcription activator-like effector nucleases)等技术，是基于 DNA 双链断裂(double strand broken，DSB)修复的非同源末端连接机制(non homologous end-joining，NHEJ)，通过蛋白-DNA 相互作用识别特定 DNA 序列，在修复过程中引入外源 DNA 从而引起移码突变，但是此类技术的局限性在于构建融合蛋白的工作量大、成本高。2013 年，、、等杂志几乎同时报道了一种新型的基因组编辑手段—— CRISPR/Cas9 技术(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated system) ......