袁青，史大伟，窦海伟，辛德莉

    儿童急性呼吸道感染(acute respiratory tract infections，ARTIs)发病率高，是儿童常见的呼吸系统疾病。儿童呼吸道感染常见病原主要为细菌、病毒、非典型病原体，大部分感染是由病毒及非典型病原体引起[1]。明确感染病原有助于抗微生物药物的合理使用及呼吸道传染病的早发现、早隔离、早报告、早治疗。因此，多病原检测对于儿童急性呼吸道感染的诊断和治疗非常重要[2]。本研究采用多重 PCR 技术对儿童 ARTIs 患者的咽拭子和支气管肺泡灌洗液(BALF)进行检测，了解儿童急性呼吸道感染病原分布情况，并评估多重 PCR 技术在诊断中的价值。

    1 材料与方法

    1.1 研究对象

    选取 2018 年 1 月 -2019 年 1 月北京地区多家医院(首都医科大学附属北京友谊医院、北京大学第一医院、首都医科大学附属北京朝阳医院、北京民航总医院、煤炭总医院、北京市昌平中西医结合医院)因呼吸道感染就诊的患儿咽拭子及BALF；入选标准：①年龄 6 月～14 岁；②发热伴咳嗽或咽痛等呼吸道感染症状，病程在 1～7 d的门诊和住院病人；③血常规白细胞总数(4.0～12.0)× 109/L；诊断标准参考《诸福棠实用儿科学》第八版[3]。

    1.2 方法

    1.2.1 咽拭子及 BALF 标本采集 咽拭子标本用尼龙材质植绒拭子采集，采集后置于装转运培养基的采样管中，BALF 标本按照电子支气管镜操作规范留取[4]，分装后于 -80 ℃ 冰箱中保存。

    1.2.2 核酸提取 核酸提取采用康为世纪生物科技有限公司的通用基因组 DNA 提取试剂盒(批号20321)，具体操作按照试剂盒说明书要求进行。

    1.2.3 13 种呼吸道病原多重 PCR 检测 应用13 种呼吸道病原多重检测试剂盒(宁波海尔施基因科技有限公司，批号：109103001)进行 PCR 扩增，操作过程按说明书进行，将PCR 产物送至宁波海尔施基因科技有限公司进行毛细电泳片段分离。检测的病原包括甲型流感病毒(InfA)、甲型流感病毒 H1N1(2009)(InfA-H1N1)、季节性流感病毒(InfA-H3N2)、乙型流感病毒(InfB)、副流感病毒(HPIV)、人腺病毒(HAdV)、博卡病毒(HBoV)、人鼻病毒(HRV)、肺炎衣原体(CP)、肺炎支原体(MP)、人偏肺病毒(HMPV)、冠状病毒(HCoV)和人呼吸道合胞病毒(RSV) ......